[发明专利]人体液中肌炎、重症肌无力自身抗体检测试剂盒及方法

权利要求书

1.人体液中肌炎、重症肌无力自身抗体检测试剂盒，其特征在于，包括试纸条、工作液和封闭蛋白液；

所述的试纸条包括垫板、设置有对照线和检测线的载体膜、吸水垫、金标垫和样品垫；所述的载体膜检测线上固化有靶抗原Ag，Ag表示肌炎、重症肌无力疾病自身抗体对应的靶抗原中的某一抗原，具体为：肌炎特异性抗体对应的靶抗原MDA5、SAE1、SAE2、Mi-2α、Mi-2β、TiF1γ、HMGCR、cN1A、NXP2、SRP54、SRP68、Jo-1、PL-7、PL-12、Ha、OJ、EJ、KS，肌炎相关性抗体对应的靶抗原PM-SCL70、PM-SCL75、PM-SCL100、U1RNP、Ro-52、Ku-70、Ku-80，其他肌炎自身抗体对应的靶抗原ZOA、ZOB、TYR、THTO、RNAPIII、UBF1，重症肌无力自身抗体对应的靶抗原MuSK、LRP4、Titin、MAG；

对照线上固化有阴性对照抗原，所述阴性对照抗原为GAPDH或actin；所述的吸水垫、载体膜、样品垫、金标垫均铺设在垫板上，吸水垫设置在载体膜对照线端，样品垫或金标垫设置在载体膜检测线端；

其中，工作液为1×PBS或1×TBS或100mM磷酸钠盐缓冲液、0.5％～1％Triton X-100或0.5％～1％Tween-20、0.02％～0.05％EDTA的混合液，工作液的pH＝6.8～7.2；

封闭蛋白液通过以下方法制备得到：

将pET28a-GST或pET28a质粒载体转化至大肠杆菌中，得到含有pET28a-GST或pET28a质粒的菌体；将含有pET28a-GST或pET28a质粒菌体的菌液离心处理，所得上清液中加入破菌液，超声破碎15～35min后离心处理，取上清液，加入5％～10％BSA、2％～5％的PEG12000和1×蛋白酶抑制剂，得到为蛋白封闭液。

2.如权利要求1所述的人体液中肌炎、重症肌无力自身抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的金标垫经过以下方法制备得到：

步骤1，将4mL 1％氯金酸和去离子水混合后在90～100℃搅拌至有气泡产生，再加入5mL 1％柠檬酸三钠后继续在90～100℃加热，待溶液颜色变为深酒红色后再在90～100℃继续加热5min，室温下冷却；

步骤2，将步骤1制备得到的金颗粒与0.05～2M K₂CO₃混合，加入0.5～2μg/μL的羊抗人IgG抗体，混匀，室温下静置30～60min；加入5％～15％BSA，室温下搅拌10～20min，离心取上清液，上清液继续离心处理，去除上清，所得沉淀即为金标二抗；

步骤3，将玻璃纤维垫用金标稀释液湿润后，37℃干燥后用0.5％～1％海藻糖湿润一半的玻璃纤维垫；再在整个玻璃纤维垫上平铺金标二抗，在37℃下烘干，得到金标垫；

其中，金标稀释液由0.01％～0.05％硼酸缓冲液、0.1％～0.2％PVA、0.5％～1％Tween20、0.5％～1％海藻糖混合而成，金标稀释液pH＝9.0～9.2。