[发明专利]人体液中肌炎、重症肌无力自身抗体检测试剂盒及方法

说明书

本发明公开了人体液中肌炎、重症肌无力自身抗体检测试剂盒及方法，检测试剂盒包括试纸条、工作液和封闭蛋白液；检测方法包括将工作液、封闭蛋白液混合形成样品稀释液，在样品稀释液中加入待检测样品；将待检测样品滴加到试纸条的样品垫上；取下试纸条上的吸水垫和样品垫，对载体膜进行洗涤，洗涤结束后再将吸水垫和金标垫固定在载体膜的两端；试纸条的金标垫端浸入工作液中，观察显色情况。本发明在检测过程中样品层析方法为倒层析法，同时载体膜洗涤方法为超声洗涤，有效的增加的检测灵敏度和特异性，强阳性血清稀释万倍以上仍可检测出抗体。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种人体液中肌炎、重症肌无力自身抗体检测试剂盒及方法。

背景技术

特发性炎性肌病(Idiopathic inflammatory myopathies，IIMs)是一种罕见的自身免疫性疾病，该病的特点是肌肉炎症，导致近端肌肉萎缩和残疾，不同的皮肤皮疹，溃疡，恶性肿瘤等症状。50％以上的IIM患者体液中能检测到自身抗体，因此自身免疫被认为在肌炎的发病机制中起重要作用。目前研究已经证明这些自身抗体以细胞核和细胞质蛋白为靶点，通常它们被分成两个亚群，肌炎特异性自身抗体(Myositis-specificautoantibodies，MSAs)和肌炎相关自身抗体(Myositis-associated autoantibodies，MAAs)。大量的临床相关研究显示，MSAs和MAAs是肌炎的重要标志物，它们有助于病情诊断，并有助于将患者分为更准确的同质组，以便开展针对性的治疗方案。迄今为止，有文献报导的MSAs和MAA主要有ASA、SAE、Mi-2、MDA5、Ku、Ro-52等十余种，与之对应的不同亚型的靶抗原有几十种之多。

重症肌无力(Myasthenia gravis，MG)是一种罕见的骨骼肌终板自身免疫性神经肌肉疾病，病理学的特征是在大多数患者中对乙酰胆碱受体自身抗体或在其他患者中针对肌肉特异性酪氨酸激酶(MuSK)抗体，以及在较小子集中越来越多的其他突触后蛋白。致病性自身抗体导致神经肌肉接头肌肉终板内功能性AChR数量减少或功能性中断。该病的临床亚型和自身抗体种类有关，准确识别自身抗体有助于开展特定疗法。

目前针对肌炎和重症肌无力疑似患者血液和脑脊液中自身抗体检测的方法主要有间接免疫荧光法、流式细胞术、酶联免疫吸附法、蛋白质免疫印迹法、免疫斑点法，其中间接免疫荧光法与蛋白质免疫印迹法均均有操作复杂，操作技巧强(需专业人士或有经验人士操作)，且检测时长较长(需两天)；酶联免疫吸附法与流式细胞术检测成本高，同时需要特殊设备及需要有经验人士操作；免疫斑点法虽然提高了检测灵敏度，但是检测周期也需要1h。另外，使用这些方法在临床检测上的累积灵敏度估计为60％～80％，而且均存在操作繁琐，检测成本高，抗体需求量大，检测过程耗时等不足。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的是提供一种人体液中肌炎、重症肌无力自身抗体检测试剂盒及方法，解决现有的检测方法或检测试剂盒检测成本高、抗体需求量大、检测灵敏度低、检测过程耗时等问题。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案予以实现：

人体液中肌炎、重症肌无力自身抗体检测试剂盒，包括试纸条、工作液和封闭蛋白液；

所述的试纸条包括垫板、设置有对照线和检测线的载体膜、吸水垫、金标垫和样品垫；所述的载体膜检测线上固化有靶抗原Ag，Ag表示肌炎、重症肌无力疾病自身抗体对应的靶抗原中的某一抗原；对照线上固化有阴性对照抗原；所述的吸水垫、载体膜、样品垫、金标垫均铺设在垫板上，吸水垫设置在载体膜对照线端，样品垫或金标垫设置在载体膜检测线端；

其中，工作液为1×PBS或1×TBS或100mM磷酸钠盐缓冲液、0.5％～1％Triton X-100的混合液或0.5％～1％Tween-20、0.8％～1.0％NaCl的混合液，工作液的pH＝7.2～7.5；

封闭蛋白液通过以下方法制备得到：