[发明专利]一种苯丙氨酸脱氢酶及其制备方法与用途

权利要求书

1.一种苯丙氨酸脱氢酶的催化用途，其特征在于：所述苯丙氨酸脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述催化的体系中含有有机溶剂或离子液体；所述有机溶剂为体积分数20%的甲醇、体积分数30%的甲醇、体积分数30%的乙醇、体积分数30%的异丙醇或体积分数30%的乙腈中的至少一种；所述离子液体为0.08～0.1 M的1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐[EMIM]BF₄、10 mM的1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐[BMIM]BF₄或10 mM的N,N’-(亚甲基)双(1-(3-乙烯基咪唑))溴DVIm-Br中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的苯丙氨酸脱氢酶的催化用途，其特征在于：所述催化的体系还包括：底物和NADH溶解于pH 9～11的甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液或氯化铵-氨水缓冲溶液中，底物的浓度为10～500 mM，苯丙氨酸脱氢酶浓度为10～200 U/L，温度为5～70℃。

3.根据权利要求1所述的苯丙氨酸脱氢酶的催化用途，其特征在于：对所述苯丙氨酸脱氢酶进行有机溶剂耐受性测定的方法包括：在平行条件下，向催化的体系中分别添加了不同的有机溶剂并使各有机溶剂的终浓度至10～50%，于20～70 ℃、150～250 rpm平行地震荡0.5～10 h，然后构建多种有机溶剂体系酶活性高通量检测平台，即利用酶标仪平行地同时测定加入有不同有机溶剂的体系中苯丙氨酸脱氢酶的酶活力，以同时测定不同有机溶剂对苯丙氨酸脱氢酶活性和/或稳定性的影响，从而同时得到该苯丙氨酸脱氢酶对不同有机溶剂的耐受性；

对所述苯丙氨酸脱氢酶进行离子液体耐受性测定的方法包括：在平行条件下，向催化的体系中分别添加了不同的离子液体并使各离子液体的终浓度至0～6 M，于20～70 ℃、150～250 rpm平行地震荡0.5～10 h，然后构建多种离子液体体系酶活性高通量检测平台，即利用酶标仪平行地同时测定加入有不同离子液体的体系中苯丙氨酸脱氢酶的酶活力，以同时测定不同离子液体对苯丙氨酸脱氢酶活性和/或稳定性的影响，从而同时得到该苯丙氨酸脱氢酶对不同离子液体的耐受性。