[发明专利]一株猪繁殖与呼吸综合征病毒1型分离株感染性克隆构建、拯救与应用

权利要求书

1.一株猪繁殖与呼吸综合征病毒1型分离株感染性克隆构建，其特征是，提供一种重组载体，包含PRRSV1基因组全长cDNA序列，该全长cDNA序列的5’端加有巨细胞病毒真核启动子序列，3’端Poly(A)尾下游加有丁肝炎病毒核酶序列以及牛生长激素多聚腺苷酸信号转录终止序列；

所述载体为pACYC177低拷贝载体，经过基因合成和同源重组在pACYC177载体上插入五个单一限制性酶切位点SgsI, Pfl23II,BglII，Bsp1407I和XbaI，用于PRRSV1弱毒株HLJB1的感染性克隆构建。

2.根据权利要求1所述的一株猪繁殖与呼吸综合征病毒1型分离株感染性克隆拯救，其特征是，将上述重组载体与高效转染试剂混合后可直接转染BHK-21细胞后再感染PAM细胞，以拯救获得HLJB1感染性克隆病毒。

3.如权利要求1所述一株猪繁殖与呼吸综合征病毒1型分离株的应用，其特征是，提供一种人工克隆的PRRSV1野毒株在研究PRRSV1毒株Marc-145细胞适应性上的应用：利用感染性克隆平台，通过将不能适应Marc-145的PRRSV野毒株与能适应Marc-145细胞的PRRSV1疫苗株进行相应基因片段替换，解析决定PRRSV1野毒株Marc-145细胞适应性的相关基因及关键位点。

4.如权利要求1所述一株猪繁殖与呼吸综合征病毒1型分离株的应用，其特征是，提供一种人工改造的PRRSV1弱毒疫苗候选株，所述人工改造的弱毒疫苗候选株是PRRSV1弱毒株HLJB1的感染性克隆病毒，该人工改造弱毒疫苗候选株可应用于制备新型PRRSV1基因工程疫苗。