[发明专利]一种巴氯芬人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种巴氯芬人工半抗原，其特征在于，其分子结构式如(Ⅰ)所示：

2.如权利要求1所述巴氯芬人工半抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将巴氯酚和三氟乙酸酐按摩尔比1∶1.1混合，加入3A分子筛干燥过的苯，室温下搅拌反应1小时，接着转入80℃油浴中继续搅拌回流3小时，反应结束，冷却至室温，将溶剂减压蒸干得淡黄色油状物A；

(2)将淡黄色油状物A、N-羟基琥珀酰亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐按摩尔比1∶1.35～1.5∶2.45～3.0混合，加入二氯甲烷溶解，室温搅拌反应18小时；结束反应将反应液转入分液漏斗中，分别用0.1N的盐酸、纯化水、饱和的碳酸氢钠溶液、饱和的食盐水洗涤有机相，取有机相干燥、过滤、减压蒸干得灰白色固体B；

(3)将对氨甲基苯甲酸溶于体积比为2∶1的四氢呋喃和纯化水的混合溶剂中，室温下搅拌均匀，然后加入灰白色固体B的四氢呋喃溶液，此时反应液浑浊；再加入1N的氢氧化钠水溶液，室温下搅拌反应3小时；结束反应，减压蒸干溶剂，加入双蒸水，用6N的盐酸调pH＝6，用乙酸乙酯萃取三次，收集有机相，干燥、过滤、减压蒸干、TLC薄层色谱分离得黄色油状物Ⅰ，即巴氯芬人工半抗原。

3.一种巴氯芬人工抗原，其特征在于，其分子结构式如(Ⅱ)所示：

式(Ⅱ)中，BSA为牛血清蛋白；通过活泼酯法使巴氯芬人工半抗原与牛血清蛋白结合，获得巴氯芬人工抗原。

4.一种权利要求3所述的巴氯芬人工抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)将巴氯芬人工半抗原Ⅰ与N-羟基琥珀酰亚胺、二环己基碳二亚胺以摩尔比为1∶1.35～1.5∶1.35～1.5溶解于N，N-二甲基甲酰胺中，室温搅拌反应18小时，反应结束后离心取上清液；巴氯芬人工半抗原Ⅰ的分子结构式如下：

(b)将上清液滴加到牛血清蛋白溶液中，迅速混合均匀并置于4℃的环境下静置过夜，经pH＝12.00的0.5％碳酸钠水溶液和磷酸盐缓冲溶液透析、离心取上清液，获得巴氯芬人工抗原Ⅱ。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)中，所述牛血清蛋白溶液的浓度为5mg/ml，上清液与牛血清蛋白溶液的体积比为1∶10。

6.权利要求3所述巴氯芬人工抗原在制备抗巴氯芬抗体中的应用。