[发明专利]一种防治烟草花叶病毒的微生物制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种防治烟草花叶病毒的微生物制剂，其特征在于：包括微生物混合菌剂、植物免疫诱抗剂和叶片提取液，所述叶片提取液为喷淋植物免疫诱抗剂后产生免疫反应的烟草植株的叶片提取液，所述微生物混合菌剂、植物免疫诱抗剂和叶片提取液的质量百分比为微生物混合菌剂5%~10%、植物免疫诱抗剂3%~5%和叶片提取液10%~15%，余量为无菌水；其中，所述微生物混合菌剂包括解淀粉芽孢杆菌和植物乳杆菌，所述解淀粉芽孢杆菌和植物乳杆菌的质量比为（2~3）：（2~3）；所述植物免疫诱抗剂为烟草花叶病毒衣壳蛋白溶液。

2.根据权利要求1所述的一种防治烟草花叶病毒的微生物制剂，其特征在于：还包括表面活性剂，所述表面活性剂为吐温80、有机硅或丁二酸二酯磺酸钠。

3.根据权利要求2所述的一种防治烟草花叶病毒的微生物制剂，其特征在于：所述吐温80的质量百分比为3％，或所述有机硅的质量百分比为2％，或所述丁二酸二酯磺酸钠的质量百分比为1.5％。

4.根据权利要求2或3所述的一种防治烟草花叶病毒的微生物制剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，

S1制备微生物混合菌剂各菌种的种子液，将所述种子液分别进行发酵扩繁，将所述扩繁产物按照配比均匀混合；

S2在烟草花叶病毒溶液中加入乙酸，混匀后静置，离心去除RNA沉淀，然后将上清液经过脱盐柱分离，去除乙酸，将所得到的溶液在去离子水中透析12至24h，离心，将所得到的沉淀用磷酸缓冲溶液复溶，得到烟草花叶病毒衣壳蛋白溶液；

S3使用所述步骤S2中获得的烟草花叶病毒衣壳蛋白溶液喷淋烟草植株的叶片，待所述烟草植株产生免疫反应后，摘取植株叶片，粉碎后采用水提取法获得提取混合液，然后滤除固体杂质得到叶片提取液；

S4将所述步骤S1至S3中的获得产物按照配比均匀混合，得到混合溶剂；

S5向所述步骤S4中的混合溶剂内按照配比加入表面活性剂，搅拌1至2h即可。

5.根据权利要求4所述的一种防治烟草花叶病毒的微生物制剂的制备方法， 其特征在于：在所述步骤S3中，待向烟草植株的叶片喷淋烟草花叶病毒衣壳蛋白溶液1至2h后，提取叶片提取液，然后通过离子分离色谱和高效液相色谱的方法，从所述叶片提取液中分离出单一组分，并利用质谱鉴定的方法得到该单一组分的组成，以鉴定所述烟草植株是否产生免疫反应产物。