[发明专利]一种防治烟草花叶病毒的微生物制剂及其制备方法

说明书

本发明提出了一种防治烟草花叶病毒的微生物制剂，包括微生物混合菌剂、植物免疫诱抗剂和叶片提取液，叶片提取液为喷淋植物免疫诱抗剂后产生免疫反应的烟草植株的叶片提取液，微生物混合菌剂、植物免疫诱抗剂和叶片提取液的质量百分比为微生物混合菌剂5％～10％、植物免疫诱抗剂3％～5％和叶片提取液10％～15％，余量为无菌水，植物免疫诱抗剂为烟草花叶病毒衣壳蛋白溶液；本发明中的植物免疫诱抗剂起到了免疫激发因子的作用，会引发植物免疫系统产生应激性免疫反应，诱导其产生针对于烟草花叶病毒的免疫抗性，同时叶片提取液内含有大量的能够限制病毒增殖的生物化学物质，在植株自身的免疫反应还未完全发挥效力时，起到一定的病毒防治作用。

技术领域

本发明涉及微生物制剂技术领域，尤其是一种防治烟草花叶病毒的微生物制剂及其制备方法。

背景技术

烟草花叶病毒(TMV)是一种单链RNA病毒，对植物具有极强的侵染性和致病力。烟草花叶病毒病广泛分布于我国各烟区，是烟草主要病毒病害。

过去，烟草花叶病毒病的防治主要采用化学农药和转基因育种方法。但化学农药导致病毒的抗药性日益明显且造成了高量的农药残留；同样，虽然转基因技术可以高效的控制病毒病的发生和发展，但其生物安全性却引起了国内外专家和政府的高度重视。

因此，技术人员研究微生物防治方法，其原理简单来说就是，将微生物菌剂喷洒至植株叶片上，微生物有益菌附着于烟草叶片上，经过正常生命活动释放出有益于植株的，能够提高植株抗病免疫能力的生物化学物质，并被植物吸收利用，取得了一定的防治效果。

但微生物菌群的有益活动提高的是植株的生物整体的抗病免疫能力，而非专门针对于烟草花叶病毒的抵抗力，因此当植株感染烟草花叶病毒后，需要一个较长的时间进行免疫反应，即使后续成功限制了病毒的感染情况，植株本身也受到了一定程度的损伤，导致烟叶质量降低。

同时，微生物菌群为了适应生长环境，以及扩大菌群数量，需要较长的时间，且降雨或向叶片喷洒药液也会对微生物菌群在叶片的附着造成一定程度的影响，因此为了保证微生物防治的效果，需要进行多次喷药，种植工作强度较大。

发明内容

有鉴于此，本发明提出了一种靶向针对性强，抗病免疫效果好，且防治效果持续时间久的防治烟草花叶病毒的微生物制剂及其制备方法。

本发明的技术方案是这样实现的：本发明提供了一种防治烟草花叶病毒的微生物制剂，包括微生物混合菌剂、植物免疫诱抗剂和叶片提取液，叶片提取液为喷淋植物免疫诱抗剂后产生免疫反应的烟草植株的叶片提取液，微生物混合菌剂、植物免疫诱抗剂和叶片提取液的质量百分比为微生物混合菌剂5%~10%、植物免疫诱抗剂3%~5%和叶片提取液10%~15%，余量为无菌水；其中，微生物混合菌剂包括解淀粉芽孢杆菌和植物乳杆菌，解淀粉芽孢杆菌和植物乳杆菌的质量比为（2~3）：（2~3）；植物免疫诱抗剂为烟草花叶病毒衣壳蛋白溶液。

在以上技术方案的基础上，优选的，还包括表面活性剂，表面活性剂为吐温80、有机硅、乙氧基改性聚三硅氧烷或丁二酸二酯磺酸钠。

更进一步优选的，表面活性剂的质量占溶液质量的1％~3％。

更进一步优选的，吐温80的质量百分比为3％，或有机硅的质量百分比为2％，或乙氧基改性聚三硅氧烷的质量百分比为1％，或丁二酸二酯磺酸钠的质量百分比为1.5％。

第二方面，提供了一种防治烟草花叶病毒的微生物制剂的制备方法，包括以下步骤，

S1制备微生物混合菌剂各菌种的种子液，将种子液分别进行发酵扩繁，将扩繁产物按照配比均匀混合；

S2在烟草花叶病毒溶液中加入乙酸，混匀后静置，离心去除RNA沉淀，然后将上清液经过脱盐柱分离，去除乙酸，将所得到的溶液在去离子水中透析12至24h，离心，将所得到的沉淀用磷酸缓冲溶液复溶，得到烟草花叶病毒衣壳蛋白溶液；