[发明专利]一种大规模快速生产病毒载体的方法在审
| 申请号： | 202010614392.6 | 申请日： | 2020-06-30 |
| 公开（公告）号： | CN111876392A | 公开（公告）日： | 2020-11-03 |
| 发明（设计）人： | 石先灯;李进;吴健华 | 申请（专利权）人： | 恒瑞源正（上海）生物科技有限公司;恒瑞源正（广州）生物科技有限公司;恒瑞源正（深圳）生物科技有限公司;恒瑞源正（北京）生物医药有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/02 | 分类号： | C12N7/02;C12N15/867 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 陆惠中;田欢 |
| 地址： | 200120 上海市浦东新区中国（上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 大规模 快速 生产 病毒 载体 方法 | ||
1.一种生产病毒载体的方法，其特征在于，包括：
S1：使用滤器对含有慢病毒载体的细胞培养液进行过滤澄清；
S2：将S1得到的澄清液进行超滤浓缩和换液，得到浓缩后的慢病毒载体；
S3：将S2得到的慢病毒浓缩液添加核酸酶进行消化；
S4：将S3消化过的样品上样Sepharose 6FF层析柱，收集第一个吸收峰；
S5：将S4收集到的样品上样阴离子交换层析柱，使用洗脱液洗脱收集；
S6：将S5收集到的样品进行超滤浓缩和换液，即得到慢病毒载体。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S1中，使用0.65或0.45μm玻璃纤维滤器进行过滤澄清。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S2中，超滤膜截留分子量是100-500KD。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S3中，将得到的慢病毒浓缩液使用包含全能核酸酶的消化反应液进行消化；优选的，消化反应液包括：10-100mM Tris-Cl，1-10mMMgCl2和5-200U/ml全能核酸酶；优选的，消化反应条件为：在37℃下反应30-120分钟。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S4中，将消化后的样品上样到预先平衡过的Sepharose 6FF层析柱；平衡层析柱缓冲液中Tris-Cl浓度为10-100mM，NaCl浓度为10-300mM，pH值为7-9。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S5中，将S4得到的样品直接上样到预先平衡好的Mustang Q膜层析柱，使用洗脱液洗脱，收集第一个吸收峰后使用培养基进行稀释，稀释3-5倍；优选的，培养基为DMEM培养基。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，使用的平衡层析柱缓冲液中Tris-Cl浓度为10-100mM，NaCl浓度为10-300mM，pH值为7-9；优选的，洗脱液中Tris-Cl浓度为10-100mM，NaCl浓度为0.3-1.0M，pH值为7-9。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S6中，超滤膜截留分子量是50-300KD。
9.根据权利要求1-8任一项所述的方法得到的慢病毒载体。
10.一种产品，其特征在于，所述产品包括权利要求9所述的慢病毒载体。
11.根据权利要求9所述的慢病毒载体或权利要求10所述的产品在基因治疗领域中的应用。
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