[发明专利]一种筛选能将L-氨基酸转化为2-酮酸酶的方法

权利要求书

1.一种筛选能将L-氨基酸转化为2-酮酸酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：

用每个亚家族HMM图谱对最终数据库中的序列进行评分获得E值低于0.001的序列；

得到属于I和II类的15个AT。

2.依据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述最终数据库中的序列的获得方法，包括：

将UniprotKB数据库中源自细菌和古细菌的未被研究的AspAT/ARAT和AlaAT序列下载为数据集，然后对数据集去除冗余序列得最终数据库的序列。

3.依据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述去除冗余序列的方法为去除氨基酸个数＞200且与AspAT/ARAT或AlaAT序列的相似度＜90％的序列。

4.依据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HMM亚家族图谱的建立方法，包括：

从Swiss-Port检索已被研究确认的AspAT/ARAT和AlaAT的序列；

对这些序列去除冗余，使用HMMER软件包建立HMM亚家族图谱。

5.依据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述AT用于合成手性非天然氨基酸的方法，包括：

将L-氨基酸通过基于AT的级联反应体系中氧化形成2-酮酸，得2-酮酸反应液；

往2-酮酸反应液中添加0.3mg StDAPDH W121L/H227I或PfNMAADH，0.2mg GDH，1.3当量的葡萄糖和5当量的胺，在pH为8.0-8.5条件下反应。

6.依据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述反应体系的条件为：30℃，200rpm，1mL反应体积。

7.依据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述反应体系成分包括：0.2M磷酸盐缓冲液(pH7.5)，30mM L-氨基酸，1mM 2-酮戊二酸，0.25mg/ml ATs，0.1mg/ml LGOX，0.1mg/ml过氧化氢酶和20μM PLP。