[发明专利]栽培花生AhGPAT9B基因的克隆方法

说明书

本发明公开了一种栽培花生AhGPAT9B基因的克隆方法。本发明设计筛选了7对覆盖AhGPAT9基因的引物(BG01‑BG07)，能够特异扩增栽培花生B染色体组AhGPAT9B基因，为深入研究花生GPAT9基因、解析种质间AhGPAT9B基因的等位变异提供技术支持，对于深入分析基因功能和同源基因间的关系有重要参考意义，同时对利用基因工程提高花生含油量和培育高油花生新品种具有重要意义。

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体涉及一种栽培花生AhGPAT9B基因的克隆方法。

背景技术

花生是我国三大油料作物之一，是植物油脂和蛋白质的主要来源。三酰甘油(TAG)是植物油脂的主要形式，在植物TAG的生物合成途径中，三酰甘油酰基转移酶(GPAT)将酰基载体蛋白或酰基辅酶A上的脂酰基转移到甘油-3-磷酸(G3P)的sn-1位置，形成溶血磷脂酸(LPA)，是催化TAG合成的第一个酰基转移酶，对种子的发育以及油脂的积累具有重要作用。植物GPAT家族含有很多成员。GPAT9是目前鉴定的唯一直接参与真核途径膜脂和油脂合成的GPAT家族成员，定位于内质网，属于膜结合蛋白，与动物脂肪合成相关的mGPAT3和mGPAT4同源性最高。研究花生GPAT9基因为深入系统地解析花生油脂合成通路和花生高油育种提供理论基础，对利用基因工程提高花生含油量和培育高油花生新品种具有重要意义。

栽培花生(Arachis hypogaea L.)是异源四倍体(2n＝4x＝40，AABB)，是由两个花生区组的二倍体祖先野生种A.duranensis(AA)和A.ipaensis(BB)天然杂交后经过一次性自然加倍事件形成的，基因组大小为2.7Gb。由于栽培花生包括A和B两个染色体组，且有些A染色体组和B染色体组间的同源基因序列相似性极高，因此分别克隆A染色体组和B染色体组基因序列难度较大。在以往的研究中，克隆获得的花生基因大多数未进行A和B染色体组的区分，例如，有研究者从栽培品种花育19获得了1个AhGPAT9基因，该基因在茎、花和种子中均有表达，但分属于哪个染色体组并不清楚。研究表明花生A染色体组和B染色体组间的同源基因在功能上可能存在冗余、累加、互补等多种复杂关系，因此，对两个染色体组的基因开展特异克隆和分析，对于深入分析基因功能和同源基因间的关系有重要参考价值。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种栽培花生AhGPAT9B基因的克隆方法。本发明通过分段设计引物组合，从栽培花生品种丰花2号中特异的分离得到B染色体组AhGPAT9B基因，对于深入分析研究AhGPAT9B基因的功能以及与同源基因AhGPAT9A之间的作用关系具有重要的意义。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种用于克隆栽培花生AhGPAT9B基因的引物组合，所述引物组合包括：

引物对BG01，其序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；

引物对BG02，其序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；

引物对BG03，其序列分别如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示；

引物对BG04，其序列分别如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示；

引物对BG05，其序列分别如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示；

引物对BG06，其序列分别如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示；和，

引物对BG07，其序列分别如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示。

本发明的第二方面，提供上述引物组合在从栽培花生中克隆获得B染色体组AhGPAT9B基因中的应用。