[发明专利]一种重组多形汉逊酵母的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种产脂肪酸的重组多形汉逊酵母菌株的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：构建具有SEQ ID NO：1所示的靶向核苷酸序列的sgRNA表达载体；

将所述sgRNA表达载体导入多形汉逊酵母菌株，敲除多形汉逊酵母菌株中的OpFAA1基因；

所述多形汉逊酵母菌株整合有Cas9蛋白。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括：构建具有SEQID NO：2所示的靶向核苷酸序列的sgRNA表达载体；

将所述sgRNA表达载体导入多形汉逊酵母菌株，敲除多形汉逊酵母菌株中的OpPOX1基因。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括：使所述重组多形汉逊酵母菌株过表达异柠檬酸脱氢酶2。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，使所述重组多形汉逊酵母菌株过表达异柠檬酸脱氢酶2包括：将来源于酿酒酵母的ScIDP2基因整合至所述多形汉逊酵母菌株。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括：敲除多形汉逊酵母菌株中的OpLSC2基因。

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，敲除多形汉逊酵母菌株中的OpLSC2基因包括：

将sgRNA表达载体导入多形汉逊酵母菌株，敲除多形汉逊酵母菌株中的OpLSC2基因；

sgRNA表达载体具有SEQ ID NO：5所示的靶向核苷酸序列。

7.根据权利要求1、2或5任一项所述的构建方法，其特征在于，OpFAA1基因为SEQ IDNO：3所示的核苷酸序列；

OpPOX1基因为SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列；

OpLSC2基因为SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列。

8.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述重组多形汉逊酵母菌株在基础成分培养基中发酵后，碳源包括葡萄糖、木糖和甲醇中的一种或多种的组合；脂肪酸种类包括C16-1、C16、C18-2、C18-1和C18。

9.一种产脂肪酸的重组多形汉逊酵母菌株，其特征在于，所述产脂肪酸的重组多形汉逊酵母菌株通过权利要求1至8中任一项所述的方法构建。

10.一种脂肪醇合成重组汉逊酵母菌株的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：以权利要求1~2任一项所述的构建方法得到的产脂肪酸的重组多形汉逊酵母菌株为出发菌株，使其过表达羧酸还原酶MmCAR及其辅因子npgA；

或将密码子优化后的MmCAR和npgA基因整合至所述产脂肪酸的重组多形汉逊酵母菌株，以过表达羧酸还原酶MmCAR及其辅因子npgA；

其中，密码子优化后的MmCAR基因为SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列；

密码子优化后的npgA基因为SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列。

11.根据权利要求10所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括：使所述重组多形汉逊酵母菌株过表达醇脱氢酶ADH5。