[发明专利]利用毕赤酵母分泌表达精氨酸脱亚胺酶及构建方法

权利要求书

1.一种高效表达精氨酸脱亚胺酶的构建方法，其特征在于，所述高效表达精氨酸脱亚胺酶的构建方法通过密码子优化异源精氨酸脱亚胺酶基因，并利用基因工程手段将该基因整合到毕赤酵母基因组上，由起始信号元件醇氧脱氢酶强启动子、α-因子信号肽基因及融合在起始信号元件C端的精氨酸脱亚胺酶基因和终止信号构建了由甲醇作为诱导物的严谨性的分泌表达载体，通过电转毕赤酵母GS115感受态细胞，获得精氨酸脱亚胺酶表达受严格控制的重组表达工程菌种。

2.如权利要求1所述高效表达精氨酸脱亚胺酶的构建方法，其特征在于，所述高效表达精氨酸脱亚胺酶的构建方法包括:

步骤一，根据GenBank提供的大肠杆菌K-12的精氨酸脱亚胺酶基因序列设计引物F、R，DNA为SEQ ID NO：2，氨基酸序列为SEQ ID NO：3以大肠杆菌基因组为模板扩增精氨酸脱亚胺酶基因，凝胶电泳条带约为1224bp；

步骤二，将PCR产物精氨酸脱亚胺酶基因进行纯化，连接到BDM载体上，得到重组质粒efADIm₃-BDM，菌落PCR验证后送去测序；

步骤三，利用4种限制性酶切酶EcoRⅠ、SPeⅠ、BamHⅠ、XbaⅠ进行酶切，酶连，依次得到串联的表达盒式结构的质粒。

3.如权利要求1所述高效表达精氨酸脱亚胺酶的构建方法，其特征在于，步骤二中，重组质粒efADIm₃-BDM含有由起始信号元件醇氧脱氢酶强启动子α-因子信号肽基因及融合在起始信号元件C端的精氨酸脱亚胺酶基因和终止信号。

4.如权利要求1所述高效表达精氨酸脱亚胺酶的构建方法，其特征在于，步骤三后，在甲醇诱导下分泌表达精氨酸脱亚胺酶。

5.一种如权利要求1所述高效表达精氨酸脱亚胺酶，其特征在于，所述表达精氨酸脱亚胺酶的DNA序列为SEQ ID NO：1。

6.一种利用权利要求1所述高效表达精氨酸脱亚胺酶制备的用于消灭或控制精氨酸营养缺陷型癌细胞生长的药物。