[发明专利]浓缩的水包油型亚微乳佐剂及其制备方法

说明书

本发明属于疫苗的水包油乳液佐剂领域，涉及一种浓缩的水包油型亚微乳佐剂及其制备方法。在优选的技术方案中，亚微乳佐剂为2、3、4、6、8倍浓度的MF59。发明制备的浓缩的微乳佐剂相对稳定，佐剂粒径受制备浓度的影响小，可用作疫苗佐剂。在使用时可以按需稀释，提高设备利用率，降低生产成本。

技术领域

本发明涉及例如制备疫苗的水包油乳液佐剂的领域，具体地，涉及制备浓缩的水包油型亚微乳佐剂及其制备方法。

技术背景

疫苗佐剂MF59是一种鲨烯、聚山梨酯80(也称作吐温80)和去水山梨糖醇三油酸酯(也称作司盘85)的亚微米水包油乳液。它也可包含枸橼酸根离子，如10mM枸橼酸钠缓冲剂。

中国专利CN102740832B及CN102858322B披露该乳液的体积组成可以是约5％角鲨烯、约0.5％吐温80和约0.5％司盘85,而且包含10mM枸橼酸钠缓冲剂。并且提供了一种制备微流化水包油乳液(例如MF59)的改良方法，特别是适合用于商业规模和使用过滤的方法。其中CN102740832B提供了一种制备微流化水包油乳液的装置：包括交互作用室，其包含多条Z型管道和包含至少一条管道的辅助处理模块，其中所述辅助处理模块位于交互作用室下游。

工业化生产中，设备的利用率极为重要，浓缩的乳液佐剂意味着降低的生产成本，节约的保存空间。

发明内容

本发明提供了一种制备浓缩的水包油型亚微乳佐剂的方法，其中该方法包括步骤：

i)，制备具有第一平均油滴尺寸的第一乳液，和

ii)微流化第一乳液形成具有比第一平均油滴尺寸小的第二平均油滴尺寸的第二乳液，

其中，亚微乳佐剂中油的含量是5-50％v/w(不含5％)，优选地

油的含量是10％、15％、20％、30％和40％(v/w)。

在本发明的一个实施方案中，

(ii)的压力是500-1400bar、微流化次数为2-9次且冷却水温度是7-25℃。

在本发明的一个实施方案中，浓缩的水包油型亚微乳佐剂包含油、表面活性剂、缓冲剂和水。

在本发明的一个实施方案中，

油选自花生油、大豆油、椰子油、橄榄油、霍霍巴油、红花油、棉花籽油、葵花籽油、芝麻籽油、玉米油、鱼肝油、鲸油、生育酚、鲨烯中的一种或多种；

表面活性剂选自聚氧乙烯去水山梨糖醇酯表面活性剂(吐温)、磷脂、衍生自十二烷醇、十六烷醇、十八烷醇和油醇的聚氧乙烯脂肪醚(苄泽表面活性剂)、聚氧乙烯-9-月桂醚以及去水山梨糖醇酯(司盘)；优选地，是聚山梨酯20、聚山梨酯80、磷脂酰胆碱(卵磷脂)、苄泽30、司盘85的一种或多种；

缓冲剂选自：枸橼酸缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、Tris缓冲剂、硼酸盐缓冲剂、琥珀酸盐缓冲剂、组氨酸缓冲剂；

在本发明的一个实施方案中，角鲨烯、司盘85、聚山梨酯80的重量比是约12.9:1.5:1.5；且最终形成的油相和水相混合物中角鲨烯的含量是5-50％v/w(不含5％)，优选地，油相和水相混合物中角鲨烯的含量是10％、15％、20％、30％和40％。

在本发明的一个实施方案中，浓缩的水包油型亚微乳佐剂含有角鲨烯、司盘85、聚山梨酯80及枸橼酸缓冲剂，其中角鲨烯、司盘85、聚山梨酯80的重量比是约12.9:1.5:1.5；以及枸橼酸缓冲剂浓度为10mM；其中角鲨烯的含量是5-50％v/w(不含5％)，即亚微乳佐剂为N倍浓度的MF59，N为1-10的、不包含1的数；优选地，亚微乳佐剂中角鲨烯的含量是10％、15％、20％、30％和40％(v/w)，即2、3、4、6、8倍浓度的MF59。