[发明专利]一种香豆素类荧光衍生试剂的设计合成及其在氟虫腈检测中的应用

说明书

本发明涉及食品和农业安全检测领域，具体涉及一种结构新颖的香豆素类荧光衍生试剂的设计合成及其在氟虫腈检测中的应用。经试验证明，本发明所设计合成的香豆素类荧光衍生试剂，具有很强的荧光强度，基于该衍生试剂所建立的柱前衍生化测定氟虫腈的HPLC‑FLD方法灵敏度高、检测限和定量限低、稳定性和重现性好，将该方法应用于鸡蛋中残留氟虫腈的检测，结果准确、可靠，优于目前报道的HPLC‑MS/MS、GC‑MS方法。本发明所设计合成的香豆素类荧光衍生试剂性能优良，基于其所建立的氟虫腈柱前衍生化检测方法灵敏、可靠、准确，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及食品和农业安全检测领域，具体涉及一种香豆素类荧光衍生试剂的设计合成及其在氟虫腈检测中的应用。

背景技术

2017年，欧洲多国市场上相继发现了氟虫腈含量超标的“毒鸡蛋”，此次“毒鸡蛋”事件波及到了世界多个国家和地区，韩国和我国台湾、香港等地区也相继发现该“问题鸡蛋”。“毒鸡蛋”事件引起人们对食品安全的高度关注，并以此敲响预防、控制氟虫腈残留超标的警钟。高灵敏度、高准确性的检测技术是保证高标准限量监控工作顺利进行的基础，因此，氟虫腈残留检测的研究备受关注。

氟虫腈，中文商品名称为：锐劲特，是普朗克公司(法国)研制的一种杀虫效果良好的高活性杀虫剂，于1993年投入市场，被广泛应用于农业病虫害的防治。该杀虫剂的作用机理为：通过害虫体内一种抑制性神经递质-GABA(γ-氨基丁酸)调节的氯通道干扰氯离子进出的通路，破坏中枢神经系统的活性并造成害虫死亡。但氟虫腈易残留，在自然界中难降解，对环境不利，因此对其进行检测和控制是很有必要的。

目前，食品中氟虫腈及其代谢物的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)、高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)、气相色谱法(GC)以及气相色谱-质谱联用法(GC-MS)，上述检测方法各有优缺点，但也存在一定的不足，如样品测前处理复杂、检验成本高、需要借助昂贵、精密的仪器、操作较为繁琐等不足。因此，开发一种较为稳定、灵敏、选择性强且干扰小的检测方法很有必要。

氟虫腈分子结构中吡唑环5位游离的氨基容易被修饰，针对该基团通过与特定的荧光衍生试剂进行衍生化反应，生成含有荧光发光基团的氟虫腈衍生物，从而建立氟虫腈残留的荧光检测方法，通过增强所接入荧光体的荧光强度提高荧光检测的灵敏度和检测限是可行的。

本发明基于上述分析，合成了荧光较强、结构新颖的香豆素类荧光衍生试剂，在此基础上研究了氟虫腈荧光衍生化反应体系，建立了氟虫腈HPLC-FLD检测方法，从根本上提升了氟虫腈荧光检测的灵敏度和稳定性，实现了对氟虫腈高灵敏度定量检测这一目标，为鸡蛋中氟虫腈及其代谢物残留检测与控制提供了合理、有效的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种结构新颖的香豆素类荧光衍生试剂7-(二乙氨基)-2-氧-2H-色酮-3-羧酸，并提供该香豆素类荧光衍生试剂的制备方法，其是以4-(二乙氨基)水杨醛为主要原料，通过化学合成制备得到。本发明还提供了基于上述香豆素类荧光衍生试剂所建立的柱前衍生化检测氟虫腈的HPLC-FLD方法。由于本发明所设计合成的香豆素类荧光衍生试剂性能优良，基于其所建立的氟虫腈柱前衍生化检测方法灵敏、可靠、准确，因此具有很好的应用前景。

本发明的上述目的通过以下技术方案来实现：

本发明提供一种具有式(I)结构的香豆素类荧光衍生试剂L1：

本发明还提供一种制备上述香豆素类荧光衍生试剂的方法，包括以下步骤：

(1)缩合成环：将式(II)化合物与丙二酸二乙酯进行反应得到中间体式(Ⅲ)化合物，反应式如下：

(2)水解：中间体式(Ⅲ)化合物与氢氧化钠反应得到式(I)化合物，反应式如下：