[发明专利]一种利拉鲁肽固相合成方法

权利要求书

1.一种利拉鲁肽固相合成方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一，通过液相合成的方法制备赖氨酸三肽片段Fmoc-Lys-(Glu(N^α-Palmitoyl)-OtBu)-OH；

步骤二，在活化剂环境的作用下，从王树脂为起始端，与Fmoc-Gly-OH偶联制备得到Fmoc-Gly-wang树脂；

步骤三，通过固相合成法，按照利拉鲁肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中赖氨酸三肽片段采用Fmoc-Lys-(Glu(N^α-Palmitoyl)-OtBu)-OH；

步骤四，裂解，纯化，冻干，得到利拉鲁肽。

2.根据权利要求1所述的利拉鲁肽固相合成方法，其特征在于：在步骤一中，所述片段Fmoc-Lys-(Glu(N^α-Palmitoyl)-OtBu)-OH的液相合成方法为：正十六烷酸、HOSu、DCC偶联得到Palmitoyl-OSu活化脂，然后和H-Glu-OtBu反应得到二肽片段Palmitoyl-Glu-OtBu；Palmitoyl-Glu-OtBu、HOSu和DCC偶联得到Palmitoyl-Glu(OSu)-OtBu活化脂，然后和Fmoc-Lys-OH反应得到赖氨酸三肽片段Fmoc-Lys-(Glu(N^α-Palmitoyl)-OtBu)-OH。

3.根据权利要求1所述的利拉鲁肽固相合成方法，其特征在于：在步骤二中，树脂固体载体采用王树脂，所述活化剂系统选自DIC、HOBt和DMF，所述Fmoc-Gly-Wang树脂为0.2～0.4mmol/g取代度。

4.根据权利要求1所述的利拉鲁肽固相合成方法，其特征在于：在步骤三中，所述固相合成法包括以下步骤：

1)在活化剂环境的作用下，从王树脂为起始端，与Fmoc-Gly-OH偶联制备得到Fmoc-Gly-wang树脂；

2)采用由体积比为1：3的PIP和DMF组成的去保护液脱除Fmoc-Gly-树脂上的Fmoc保护基，得到H-Gly-树脂；

3)在偶联剂系统的存在下，H-Gly-树脂和Fmoc保护且侧链保护的精氨酸偶联得到Fmoc-Arg(pbf)-Gly-树脂；

4)重复上述步骤，按照利拉鲁肽主链肽序依次进行氨基酸的偶联，其中赖氨酸三肽片段采用Fmoc-Lys-(Glu(N^α-Palmitoyl)-OtBu)-OH。

5.根据权利要求1所述的利拉鲁肽固相合成方法，其特征在于：在步骤四中，裂解剂为TFA：PhSMe：TES：EDT：H₂O＝90:1:2:2:5。

6.根据权利要求1所述的利拉鲁肽固相合成方法，其特征在于：在步骤四中，纯化是将从树脂裂解下来的利拉鲁肽粗品经过乙醚：乙腈＝2:1反复洗涤，在进入制备液相纯化之前进行初步纯化，将含量由63％提升至85％以上。