[发明专利]一种利拉鲁肽固相合成方法

说明书

本发明公开了一种利拉鲁肽固相合成方法，属于多肽药物制备方法及纯化技术领域，该方法包括如下步骤：在活化剂系统的存在下，由王树脂为起始，通过固相合成法，按照利拉鲁肽主链肽的顺序一一合成，共31个氨基酸组成，序列为：His‑Ala‑Glu‑Gly‑Thr‑Phe‑Thr‑Ser‑Asp‑Val‑Ser‑Ser‑Tyr‑Leu‑Glu‑Gly‑Gln‑Ala‑Ala‑Lys‑Glu‑Phe‑Ile‑Ala‑Trp‑Leu‑Val‑Arg‑Gly‑Arg‑Gly。其中Lys侧链修饰，依次偶联Fmoc‑Glu‑OtBu、棕榈酰氯、羧基活化。本发明具有杂质少、易纯化、产品收率高、降低工作量及生产成本的优点。

技术领域

本发明属于多肽药物制备方法及纯化技术领域，具体是涉及一种利拉鲁肽固相合成方法。

背景技术

利拉鲁肽，英文名为Liraglutide，其肽序列为：H-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(N^ε-(N^α-Palmitoyl)-Lγ-GLu)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH。

利拉鲁肽是胰高血糖素样肽受体激动剂，作为一种皮下注射制剂，能起到良好的降低血糖的作用。

但现有的利拉鲁肽主要是通过基因工程等生物学方法制备，生产成本高，技术难度大，研发周期长，不利于利拉鲁肽的工业化生产。而以往利拉鲁肽固相合成方法也存在步骤繁琐、废液多、成本高等缺点。

发明内容

本发明要解决的问题是提供一种杂质少、易纯化、产品收率高、降低工作量及生产成本的利拉鲁肽固相合成方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种利拉鲁肽固相合成方法，包括以下步骤：

步骤一，通过液相合成的方法制备赖氨酸三肽片段Fmoc-Lys-(Glu(N^α-Palmitoyl)-OtBu)-OH；

步骤二，在活化剂环境的作用下，从王树脂为起始端，与Fmoc-Gly-OH偶联制备得到Fmoc-Gly-wang树脂；

步骤三，通过固相合成法，按照利拉鲁肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中赖氨酸三肽片段采用Fmoc-Lys-(Glu(N^α-Palmitoyl)-OtBu)-OH；

步骤四，裂解，纯化，冻干，得到利拉鲁肽。

在步骤一中，所述片段Fmoc-Lys-(Glu(N^α-Palmitoyl)-OtBu)-OH的液相合成方法为：正十六烷酸、HOSu、DCC偶联得到Palmitoyl-OSu活化脂，然后和H-Glu-OtBu反应得到二肽片段Palmitoyl-Glu-OtBu；Palmitoyl-Glu-OtBu、HOSu、DCC偶联得到Palmitoyl-Glu(OSu)-OtBu活化脂，然后和Fmoc-Lys-OH反应得到赖氨酸三肽片段Fmoc-Lys-(Glu(N^α-Palmitoyl)-OtBu)-OH。

在步骤二中，树脂固体载体采用王树脂，所述活化剂系统选自DIC、HOBt和DMF，所述Fmoc-Gly-Wang树脂为0.2～0.4mmol/g取代度。

在步骤三中，所述固相合成法包括以下步骤：

1)在活化剂环境的作用下，从王树脂为起始端，与Fmoc-Gly-OH偶联制备得到Fmoc-Gly-wang树脂；

2)采用由体积比为1：3的PIP和DMF组成的去保护液脱除Fmoc-Gly-树脂上的Fmoc保护基，得到H-Gly-树脂；