[发明专利]一种纯化酶、提取方法及试剂盒

权利要求书

1.一种纯化酶的提取方法，其特征在于，该方法包括：

步骤一：将动物内脏器官去杂、冲洗，得到处理后的样品；

步骤二：在步骤一处理后的样品中加入缓冲液，调节PH至7.0-9.5，先使用打碎机进行打碎，然后再使用匀浆机进行细打碎，每次打碎10-30min，间隔1-5h，然后放置于常温静置24-72h；

步骤三：将步骤二获得的静置后的样品进行盐析，溶解8h-24h，常温放置12-24h，然后进行离心，所述的离心速率为3000-11000r/min，离心时间为5-25min，再过滤，冻干，得到冻干样品；

步骤四：使用冲洗缓冲液步骤四的冻干样本进行溶解，然后使用3000-11000r/min离心5-25min，过滤，利用凝胶层析柱进行分离，再运用中空纤维柱技术对其进行换液、浓缩，即得到纯化酶。

2.根据权利要求1所述的一种纯化酶的提取方法，其特征在于，所述的步骤二的缓冲液为50-200mM/L磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、TRIS盐缓冲液、磷酸缓冲液中的一种，pH在8-12之间。

3.根据权利要求1所述的一种纯化酶的提取方法，其特征在于，所述的步骤三中盐析所用的盐为氯化钠、硫酸铵、氯化钙、氯化镁中的一种或多种组成，浓度为0.1-150g/L。

4.根据权利要求1所述的一种纯化酶的提取方法，其特征在于，所述的步骤四的冲洗缓冲液为20-100mM/L磷酸盐缓冲液、硼酸缓冲液、甘氨酸-柠檬酸缓冲液、Tris缓冲液、PIPES缓冲液、柠檬酸缓冲液中的一种，pH在7-12之间。

5.根据权利要求1所述的一种纯化酶的提取方法，其特征在于，所述的步骤四用中空纤维柱技术对其进行换液、浓缩中，所用的缓冲液为20-100mM/L磷酸盐缓冲液、硼酸缓冲液、甘氨酸-柠檬酸缓冲液、Tris缓冲液、PIPES缓冲液、柠檬酸缓冲液中的一种，浓缩倍数为2-15倍。

6.权利要求1-5任一项所述的方法得到的纯化酶。

7.包括权利要求6所述的纯化酶的一种试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括R1和R2试剂，其中R1包括第一缓冲液、纯化酶、表面活性剂、试剂稳定剂；

R2包括第二缓冲液、激活剂。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的第一缓冲液和第二缓冲液分别为Tris、磷酸盐、碳酸盐、硼酸缓冲液中的一种，浓度为1.0-300g/L。

9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的激活剂为EDTA-2K、EDTA-2Na中的一种，浓度为0.1-200g/L。

10.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的表面活性剂为吐温系列、曲拉通系列中的一种，浓度为1-10mL/L。