[发明专利]一种用于检测固体样品中杂环胺的方法

权利要求书

1.一种用于检测固体样品中杂环胺的方法，其特征在于，准备固体样品快速净化试剂盒，所述试剂盒包括第一提取试剂和第二提取试剂，所述第一提取试剂由氯化钠、SDS、碳酸钠、醋酸铅中的一种或多种组成；所述第二提取试剂为Fe₃O₄@PDA；

所述Fe₃O₄@PDA的制备方法，包括步骤：

Sa1：取三羟甲基氨基甲烷，溶于超纯水中，用盐酸调至pH为8.5，得到Tris-HCl溶液；所述三羟甲基氨基甲烷和超纯水的质量体积比是（1~10）:2g/L；

Sa2：取多巴胺，溶于步骤Sa1所述Tris-HCl溶液中，得到PDA-Tris-HCl溶液；所述多巴胺与Tris-HCl溶液的质量体积比是（1~10）:2g/L；

Sa3：取四氧化三铁，置于PDA-Tris-HCl溶液中，超声使四氧化三铁在溶液中分散均匀，得到Fe₃O₄@PDA制备液，震荡；所述四氧化三铁与PDA-Tris-HCl溶液的质量体积比是（1~10）:2g/L；所述震荡参数为：100~300rpm，室温震荡2~12h；

Sa4:用磁铁将震荡后的Fe₃O₄@PDA制备液中的固液分离，弃去液体；依次加入醇和去离子水多次清洗固体，磁力分离，弃去液体；干燥，得到Fe₃O₄@PDA；所述醇是甲醇或乙醇；

按如下步骤应用：

Sb1：取第一提取试剂，溶于超纯水中，得到第三提取试剂；所述第一提取试剂和超纯水的质量体积比是（2~20）:50g/mL；

Sb2：取待净化样品，加入第三提取试剂A，匀浆，得匀浆液；用第三提取试剂B洗涤匀浆机刀头，将洗涤后所得液体与所述匀浆液混合，离心取上清液；取所述上清液，加入第二提取试剂，漩涡震荡，磁力分离取固体后弃去上清液，将所得固体加入甲醇，漩涡震荡，磁力分离固体，取甲醇层，得净化样品制备液；

其中，所述待净化样品是固体样品；所述待净化样品和所述第三提取试剂A的质量体积比为（1~5）:10g/mL；所述上清液和所述第二提取试剂的体积质量比为（0.5~5）:（5~100）mL/mg；所述甲醇的添加量为0.5~5mL；

Sb3：不取待净化取样品，其余操作同步骤Sb2，得到试样空白液；

此后，按下述方法，以试样空白液为对照，对净化样品制备液中的杂环胺进行测定，再通过公式计算待净化样品中的杂环胺含量：

Sc1：所述净化样品制备液过0.22μm的有机系微孔滤膜，然后进行高效液相色谱串联三重四级杆质谱测定；色谱条件：色谱柱：C8 2.1×100mm分析柱；流动相A：10mM乙酸铵溶液，流动相B：乙腈，梯度洗脱程序：0~0.1min：10%B，0.1~18min：10%~30%B，18~20min：30%~100%B，20~21min：100%~10%B，21~25min：10%B；流速：0.3mL/min；柱温：35℃；进样量：1μL；得到第一色谱图；所述杂环胺的质谱条件如下：

Sc2：以甲醇为溶剂，配制六个不同质量体积浓度的杂环胺混合标准溶液，该六个标准溶液中杂环胺的质量体积浓度依次分别为：0.50ng/mL、1.00ng/mL、5.00ng/mL、50.00ng/mL、250.00ng/mL、1000.00ng/mL；将杂环胺系列混合标准溶液于附带三重四级杆质谱的高效液相色谱仪中测定，得第二色谱图，由第二色谱图得到系列标准溶液中杂环胺在该色谱条件下的出峰时间和不同浓度的峰面积；并以标准溶液质量体积浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制杂环胺标准溶液的工作曲线；

Sc3：根据步骤Sc1测得的净化样品制备液的峰面积值，从步骤Sc2绘制的系列杂环胺标准溶液的工作曲线上找到峰面积值对应的杂环胺的含量，按下式计算待测固体样品中杂环胺的含量X：

式中：X表示试样，即待净化样品中的杂环胺含量，单位ng/g；C₁表示步骤Sc1测得的样品制备液的峰面积所对应的杂环胺的含量，单位ng/mL；C₀表示试样空白液中杂环胺的含量，单位ng/mL；m表示试样质量，即所述待净化样品的质量，单位g；V表示第三提取试剂的体积，即第三提取试剂A和第三提取试剂B的体积之和，单位mL；V₁表示净化样品制备液的体积，单位mL；V₂表示上清液的体积，单位mL；

其中，所述待净化样品为牛肉、鸡肉或鲫鱼。