[发明专利]一种条件敲除Foxp3基因鼠的构建方法

权利要求书

1.一种条件敲除Foxp3基因鼠的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)分别将EGE-ZXC-007-sgRNA1和EGE-ZXC-007-sgRNA9进行体外转录，得到RNA1和RNA9；

所述EGE-ZXC-007-sgRNA1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述EGE-ZXC-007-sgRNA9的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

2)将所述步骤1)得到的RNA1、RNA9和打靶载体导入小鼠受精卵中，得到F0代小鼠；

3)对所述步骤2)得到的F0代小鼠进行flox基因型检测，得到flox基因型的F0代阳性小鼠；

4)将所述步骤3)得到的F0代阳性小鼠与野生型小鼠杂交，得到F1代小鼠，对所述F1代小鼠进行flox基因型检测，得到flox基因型的F1代阳性小鼠；

5)将所述步骤4)F1代阳性小鼠与组织特异性Cre小鼠杂交，得到floxed杂合子小鼠；

6)将所述步骤5)得到的floxed杂合子小鼠与Cre-deleter小鼠杂交，得到敲除Foxp3基因鼠。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤3)flox基因型检测使用的引物包括EGE-ZXC-007-L-GT-F、cKO-3'-DO-R、cKO-5'-DO-F和EGE-ZXC-007-R-GT-R；

所述EGE-ZXC-007-L-GT-F的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；

所述cKO-3'-DO-R的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；

所述cKO-5'-DO-F的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；

所述EGE-ZXC-007-R-GT-R的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示。

3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，flox基因型检测使用的程序包括：94℃5min；98℃30s，67℃30s-0.7℃/Cycle，68℃1kb/min，15个循环；98℃30s，57℃30s，68℃1kb/min，25个循环；68℃10min；4℃保存。