[发明专利]一种重组大肠杆菌及其在合成对羟基苯甲醛中的应用在审
| 申请号： | 202010640818.5 | 申请日： | 2020-07-06 |
| 公开（公告）号： | CN111647545A | 公开（公告）日： | 2020-09-11 |
| 发明（设计）人： | 郑璞;郑义培;吴丹;陈鹏程 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/53;C12N15/31;C12N15/70;C12P7/24;C12R1/19 |
| 代理公司： | 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 王玉仙 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 大肠杆菌 及其 成对 羟基 甲醛 中的 应用 | ||
1.一种重组大肠杆菌，其特征在于，所述的重组大肠杆菌是在大肠杆菌宿主中，以pRSFduet-1载体共表达细胞色素单加氧酶和铁氧化还原蛋白还原酶，以pETduet-1载体共表达铁氧化还原蛋白和铁氧化还原蛋白还原酶得到。
2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，编码所述的细胞色素单加氧酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，编码所述的铁氧化还原蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，编码所述的铁氧化还原蛋白还原酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
5.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述的大肠杆菌宿主为E.coliBL21。
6.一种权利要求1～5任一项所述的重组大肠杆菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)构建重组质粒：将细胞色素单加氧酶和铁氧化还原蛋白还原酶基因分别插入pRSFduet-1质粒上的酶切位点BamHI/SacI和NdeI/XhoI，得到重组质粒pRSFduet-1-CYP199A4-HaPux；将铁氧化还原蛋白和铁氧化还原蛋白还原酶基因分别插入入pETduet-1质粒上的酶切位点NdeI/XhoI和XbaI/EcoRI，得到重组质粒pETduet-1-HaPuR-HaPux；
(2)将重组质粒pRSFduet-1-CYP199A4-HaPux和重组质粒pETduet-1-Ha PuR-HaPux依次转入大肠杆菌宿主中，筛选阳性转化子得到所述的重组大肠杆菌。
7.一种权利要求1～5任一项所述的重组大肠杆菌在合成对羟基苯甲醛中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的应用是采用所述的重组大肠杆菌全细胞作为催化剂，催化茴香醛转化为对羟基苯甲醛。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的应用具体是采用LB培养基重新悬浮重组大肠杆菌至细胞湿重为3～5g/L，加入2～4mM底物茴香醛进行转化，转化温度为25～40℃，转化pH为7～8。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的重组大肠杆菌全细胞是通过将重组大肠杆菌在35～40℃培养至对数生长后期，然后转入20～28℃进行诱导培养16～24h得到。
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