[发明专利]人NRAS基因突变的数字PCR检测方法及应用

权利要求书

1.一种用于检测基因突变的试剂，其特征在于，所述试剂选自下组：

(a)用于检测NRAS Q61突变的第一引物对，其中第一引物对包括SEQ ID No:1和2所示的引物；

(b)用于检测NRAS G12突变的第二引物对，其中第二引物对包括SEQ ID No:6和7所示的引物；

(c)上述(a)和(b)的组合。

2.如权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述试剂还包括：

(a1)与第一引物对配合使用的第一探针，其中所述的第一探针选自下组：SEQ ID No:3所示的探针、SEQ ID No:4所示的探针、SEQ ID No:5所示的探针、或其组合；和/或

(b1)与第二引物对配合使用的第二探针，其中所述的第二探针选自下组：SEQ ID No:8所示的探针、SEQ ID No:9所示的探针、或其组合。

3.如权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述试剂还包括：

(b1)与第二引物对配合使用的第二探针，其中所述的第二探针选自下组：SEQ ID No:8所示的探针、SEQ ID No:9所示的探针、或其组合。

4.如权利要求2所述的试剂,其特征在于，所述第一探针的结构(5'-3')如式I所示：

Z1-Z2-Z3 I

其中，

Z1为荧光基团；

Z2为含有锁核苷酸或不含有锁核苷酸的特异性互补核酸序列；

Z3为淬灭基团；

“-”为化学键、连接基团、或1-3个核苷酸构成的接头。

5.如权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述第二探针的结构(5'-3')如式II所示：

Z1'-Z2'-Z3' II

其中，

Z1'为荧光基团；

Z2’为含有锁核苷酸或不含有锁核苷酸的特异性互补核酸序列；

Z3'为淬灭基团；

“-”为化学键、连接基团、或1-3个核苷酸构成的接头。

6.一种试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有权利要求1所述的用于检测基因突变的试剂。

7.如权利要求1所述的用于检测基因突变的试剂或权利要求6所述的试剂盒的用途，其特征在于，用于制备一诊断产品，所述诊断产品用于评判对象是否适合用EGFR靶向药物进行治疗，或预先评估对象采用EGFR靶向药物的效果。

8.一种检测待测样本是否含有基因突变的方法，其特征在于，包括步骤：

(S1)提供一PCR反应体系，所述PCR反应体系中含有作为模板的待测样本、以及用于扩增的引物对，所述的引物对选自下组：

(a)用于检测NRAS Q61突变的第一引物对，其中第一引物对包括SEQ ID No:1和2所示的引物；

(b)用于检测NRAS G12突变的第二引物对，其中第二引物对包括SEQ ID No:6和7所示的引物；

(c)上述(a)和(b)的组合

权利要求1所述的检测基因突变的试剂；

(S2)对步骤(S1)的所述PCR反应体系进行PCR反应，从而获得扩增产物；

(S3)对步骤(S2)中产生的扩增产物进行分析，从而获得所述待测样本是否含有基因突变的分析结果。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法检测精确度为0.06％-1％，较佳地为0.0625％-0.08％。