[发明专利]一种快速构建血浆DNA测序文库的方法和试剂盒

权利要求书

1.用于构建血浆DNA测序文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)抽提血浆DNA；

2)任选将血浆DNA进行末端补平，获得末端补平后的血浆DNA；

3)将任选末端补平后的血浆DNA进行3’悬A，获得3’悬A后的血浆DNA；

4)将3’悬A后的血浆DNA与测序接头连接，获得连接产物；

5)对连接产物进行纯化，获得纯化产物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)通过选自以下的一种或两种酶来进行：T4 DNA连接酶和T7 DNA连接酶。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述测序接头为双链的测序接头。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述3’悬A采用klenow ex-酶、Taq酶、或klenow ex-酶与Taq酶的组合。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)和3)之间进行纯化步骤；或所述步骤2)和3)在一个反应体系中进行，中间没有纯化步骤。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤2)采用T4DNA聚合酶进行；且所述步骤3)采用Taq酶进行。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)和4)之间进行纯化步骤；或步骤2)、3)和4)在一个反应体系中进行，中间没有纯化步骤。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤2)采用T4DNA聚合酶进行；所述步骤3)采用Taq酶进行；且所述步骤4)采用T4 DNA连接酶和T7 DNA连接酶进行。

9.用于构建血浆DNA测序文库的试剂盒，其特征在于，包含：

-任选地将血浆DNA进行末端补平的试剂，包括dNTP、用于末端补平的酶、和末端补平缓冲液；

-进行3’悬A的试剂，包括dATP、用于末端悬A的酶、和末端悬A缓冲液；

-与测序接头连接的试剂，包括测序接头、连接酶、和连接缓冲液；和

-对连接产物进行纯化的试剂和装置。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述连接酶选自以下中的一种或两种：T4 DNA连接酶和T7 DNA连接酶。

11.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述测序接头为双链的测序接头。

12.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述所述用于末端悬A的酶为klenowex-酶、Taq酶、或klenow ex-酶与Taq酶的组合。

13.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述用于末端补平的酶为T4 DNA聚合酶。

14.根据权利要求12或13所述的试剂盒，其特征在于，所述用于末端补平的酶为T4 DNA聚合酶；所述用于末端悬A的酶为Taq酶。

15.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述用于末端补平的酶为T4 DNA聚合酶；所述用于末端悬A的酶为Taq酶；用于连接的酶为T4 DNA连接酶和T7 DNA连接酶；且用于连接的接头为双链接头。

16.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述对连接产物进行纯化的试剂选自无菌dH₂O或洗脱缓冲液；对连接产物进行纯化的装置选自纯化柱、Qiagen柱、纯化磁珠或Beckman Ampure XP beads。