[发明专利]一种(S)-邻氯苯甘氨酸甲酯酶法合成方法

权利要求书

1.一种(S)-邻氯苯甘氨酸甲酯酶法合成方法，其特征在于所述方法为：以(R,S)-邻氯苯甘氨酸甲酯为底物，以水解酶为催化剂，以pH 5-9的缓冲液为反应介质构成转化体系，在20-40℃、100-200rpm条件下进行拆分反应，反应完全后，将反应液分离纯化，获得(S)-邻氯苯甘氨酸甲酯；所述水解酶为蛋白酶6SD或固定化蛋白酶6SD。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述底物加入量以缓冲液体积计为2-14g/L，催化剂加入量以缓冲液体积计为1-20g/L。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述反应介质由有机溶剂与缓冲液以体积比1:4-20组成，所述有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯、己烷、甲基叔丁基醚或环己烷中的一种。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述反应介质由甲基叔丁基醚与pH 8.0、100mM的磷酸钠缓冲液以体积比1:9组成。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述催化剂为固定化蛋白酶6SD。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于所述固定化蛋白酶6SD按如下方法制备：(1)将戊二醛加入pH 5.0-9.0缓冲液并用磷酸氢二钠调节pH至7.8-8.2，制成体积浓度1-5％的戊二醛溶液；将载体加入体积浓度1-5％戊二醛溶液中，于10-35℃、200-300rpm浴摇床中恒温孵育1h后，离心，弃滤液，滤饼即为预处理后的载体；所述载体包括氨基树脂、环氧树脂或多壁碳纳米管；

(2)将蛋白酶6SD酶粉溶于pH 5-9缓冲液中，再加入预处理后的载体，于10℃-35℃、200-300rpm水浴摇床中恒温孵育12-36h后，离心，弃滤液，沉淀用100mM、pH 8.0磷酸钠缓冲液清洗后，获得固定化蛋白酶6SD。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于步骤(1)所述戊二醛溶液体积用量以载体重量计为100mL/g。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于步骤(1)所述载体为氨基化多壁碳纳米管。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于所述氨基化多壁碳纳米管长度为8-15nm，外直径为50μm。

10.如权利要求6所述的方法，其特征在于步骤(2)所述预处理后载体与蛋白酶6SD酶粉质量比为1:0.1-1.0；所述缓冲液体积用量以预处理后载体质量计为100mL/g。