[发明专利]N-(苯基磺酰基)苯甲酰胺化合物的HPLC分析方法

说明书

本发明公开了一种N‑(苯基磺酰基)苯甲酰胺化合物的HPLC分析方法。本发明涉及一种物质X的HPLC分析方法；所述的物质X为如式I‑A和/或I‑B所示化合物；所述的HPLC分析方法包括以下步骤：手性色谱柱中，用流动相对物质X进行洗脱，即可；所述的手性色谱柱为多糖衍生物耐溶剂型手性色谱柱；所述的手性色谱柱的柱温为25‑35℃；所述的洗脱为等度洗脱；所述的流动相包括烷烃类溶剂、醇类溶剂、卤代烃类溶剂和醚类溶剂，按体积份数计，所述的烷烃类溶剂为600‑800份，所述的醇类溶剂为50‑350份，所述的卤代烃类溶剂为30‑100份，所述的醚类溶剂为50‑200份。本发明的分析方法能够分离异构体，并能够准确测定异构体的纯度。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体而言，涉及N-(苯基磺酰基)苯甲酰胺化合物的HPLC分析方法。

背景技术

细胞凋亡是程序性细胞死亡的过程，是组织稳态的必需生物学过程。在哺乳动物中，它已被证明可以调节早期胚胎发育。在生命的晚期，细胞死亡是一种默认机制，通过该机制除去潜在危险细胞，例如携带癌症缺陷的细胞。已知若干种凋亡途径。最重要的凋亡途径之一涉及Bcl-2蛋白家族，其是细胞凋亡的线粒体（也称为“内在”）途径的关键调节剂。参见Danial和Korsmeyer，Cell 776：205-219(2004)。结构同源结构域BH1、BH2、BH3和BH4是Bcl-2家族蛋白的特征。Bcl-2蛋白质家族可以进一步分为三个亚族，这取决于每种蛋白质含有多少同源结构域及其生物活性，即它是否具有促凋亡或抗细胞凋亡功能。

Bcl-2蛋白的第一亚组含有具有全部四个同源结构域的蛋白质，即BH1、BH2、BH3和BH4。它们的一般作用是抗细胞凋亡，即保护细胞免于开始细胞死亡过程。诸如Bcl-2、Bcl-w、Bcl-xL、Mcl-1和Bfl-1/Al的蛋白质是该第一亚组的成员。属于Bcl-2蛋白的第二亚组的蛋白质含有三个同源结构域BH1、BH2和BH3，并具有促凋亡作用。第二个亚组的两个主要代表性蛋白质是Bax和Bak。Bcl-2蛋白的第三个亚组由仅含有BH3结构域的蛋白质组成，该亚组的成员通常被称为“仅BH3蛋白质”。它们对细胞的生物学作用是促细胞凋亡的。Bim、Bid、Bad、Bik、Noxa、Hrk、Bmf和Puma是第三个蛋白质亚家族的例子。

失调的凋亡途径涉及许多重要疾病的病理学，例如神经变性病症(上调的细胞凋亡)，例如阿尔茨海默氏病；和增殖性疾病(下调的细胞凋亡)，例如癌症、自身免疫疾病和促血栓形成病症。

下调的细胞凋亡(更具体地，Bcl-2蛋白质家族)可能参与癌性恶性肿瘤的发作。研究表明，例如，抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL在许多癌细胞类型中过表达。参见Zhang，NatureReviews Drug Discovery 1：101(2002)；Kirkin等，Biochimica et Biophysica Acta1644：229-249 (2004)；和Amundson等，Cancer Research 60：6101-6110(2000)。这种失调的作用是改变细胞的存活，否则细胞会在正常条件下发生细胞凋亡。与不受调节的增殖相关的这些缺陷的重复被认为是癌症进化的起点。这些发现使得用于靶向癌症的药物发现成为可能的新策略。

WO2018/027097A1公开了用于治疗对Bc1-2蛋白抑制有反应的疾病、障碍或病症（例如癌症）的N-(苯基磺酰基)苯甲酰胺及相关化合物，并具体公开了代表性化合物：N-((4-(((1,4-二噁烷-2-基)甲基)氨基)-3-硝基苯基)磺酰基)-2-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氧基)-4-(4-((6-(4-氯苯基)螺[3.5]壬-6-烯-7-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰胺（下称式1化合物），其结构式如下：

式I化合物