[发明专利]一种牛源复合微生态制剂及应用

权利要求书

1.一种牛源复合微生态制剂，其特征在于，包括：枯草芽孢杆菌与乳酸乳球菌的混合液。

2.如权利要求1所述的一种牛源复合微生态制剂，其特征在于，筛选过程如下：

步骤S1：采集大别山黄牛六段肠道中的内容物；

步骤S2：从采集的样品中分别分离乳酸菌和芽孢杆菌并进行纯化；

步骤S3：对纯化后的菌株进行鉴定；

步骤S4：根据鉴定的结果匹配枯草芽孢杆菌与乳酸乳球菌的混合液为牛源复合微生态制剂。

3.如权利要求2所述的一种牛源复合微生态制剂，其特征在于，所述步骤S2中乳酸菌分离具体包括：从各个样品中取出0.5g于生理盐水内，摇匀取出100μL的上清液，加入到MRS液体培养基内，培养24h；培养好的菌液倍比稀释到10^-5、10^-6、10^-7三个浓度梯度，将各浓度的菌液各取出100μL涂布于MRS固体培养基，37℃厌氧培养24h；将培养后的平板用接种针挑取生长形态不同的菌落于MRS固体培养基上划线，37℃厌氧培养24h，如此反复四到五次，以纯化菌株。

4.如权利要求3所述的一种牛源复合微生态制剂，其特征在于，所述步骤S2芽孢杆菌分离具体包括：从各个样品中取出0.5g于生理盐水内，摇匀，将混匀后的悬浊液置于80℃的水浴锅中水浴处理20min；从悬浊液中取出100μL的上清液，加入到LB液体培养基内，37℃培养24h；培养好的菌液用无菌生理盐水稀释到10^-5、10^-6、10^-7三个浓度，将各浓度的菌液各取出100μL涂布于LB固体培养基，37℃培养24h；将培养后的平板用接种针挑取生长形态不同的菌落在LB固体培养基上划线，37℃培养24h，如此反复四到五次，以纯化菌株。

5.如权利要求4所述的一种牛源复合微生态制剂，其特征在于，所述步骤S3中具体包括：接种环蘸取纯培养后的菌液在载玻片上涂抹均匀，固定后，进行革兰氏染色，干燥后，镜检。

6.如权利要求5所述的一种牛源复合微生态制剂，其特征在于，所述步骤S3中对分离纯化的菌液进行鉴定包括：将分离纯化的菌液摇匀，用移液枪分别无菌吸取1mL菌液加入1.5mL的灭菌后的离心管中，封口膜封口并做标记，进行16S rDNA基因序列测序，测序结果利用GenBank中的BLAST程序比对，对细菌种属进行鉴定。

7.如权利要求6所述的一种牛源复合微生态制剂，其特征在于，所述步骤S3中还包括耐酸试验和耐胆盐试验。

8.一种牛源复合微生态制剂的应用，其特征在于，应用于促进大别山黄牛犊牛的生长，提高血清免疫球蛋白、细胞因子与抗氧化指标，增强机体的免疫机能和抗氧化机能，同时能够提高肠道内有益菌群的含量，抑制致病菌的繁殖。