[发明专利]基于纳米等离子共振的新型冠状病毒颗粒定量检测方法

权利要求书

1.一种基于纳米等离子共振的新型冠状病毒颗粒定量检测方法，其特征在于包括：

第一步骤：制备孔板以及纳米等离子共振传感芯片，将纳米等离子共振传感芯片布置在孔板的孔中以制备等离光子谐振耦合效应设备；

第二步骤：制备用于放大检测信号的纳米金颗粒；

第三步骤：在纳米等离子共振传感芯片表面修饰SARS-COV-2捕获抗体，用来特异性检测SARS-CoV-2病毒颗粒的滴度；

第四步骤：用SARS-COV-2标记抗体标记纳米金颗粒；

第五步骤：向标记好的纳米金颗粒中加入不同滴度的SARS-CoV-2病毒颗粒样品，制备成混合溶液；

第六步骤：向待测孔板中加入混合溶液，完成SARS-CoV-2病毒颗粒与标记纳米金颗粒复合物的捕获；

第七步骤：通过检测加样前后在特定波长下的吸光度差值随时间的变化曲线，实现SARS-CoV-2病毒颗粒定量检测。

2.根据权利要求1所述的基于纳米等离子共振的新型冠状病毒颗粒定量检测方法，其特征在于，特定波长为580nm波长、605nm波长、620nm波长、640nm波长中的一个或多个。

3.根据权利要求1或2所述的基于纳米等离子共振的新型冠状病毒颗粒定量检测方法，其特征在于，纳米金颗粒是粒径为15～80nm的纳米金颗粒。

4.根据权利要求1或2所述的基于纳米等离子共振的新型冠状病毒颗粒定量检测方法，其特征在于，纳米金颗粒是粒径为20-70nm的纳米金颗粒。

5.根据权利要求1或2所述的基于纳米等离子共振的新型冠状病毒颗粒定量检测方法，其特征在于，制备用于放大检测信号的纳米金颗粒的方法包括：在去离子水中加入氯金酸溶液，加热至沸腾后再加入柠檬酸三钠溶液，继续加热并采用磁力搅拌器进行搅拌，溶液颜色会由黑色变至橙红色，待溶液颜色恒定，再加热预定时间后停止加热，随后静置溶液冷却至室温，以得到Au纳米颗粒分散溶液，作为纳米金颗粒。

6.根据权利要求1或2所述的基于纳米等离子共振的新型冠状病毒颗粒定量检测方法，其特征在于，在纳米等离子共振芯片表面修饰SARS-COV-2捕获抗体的方法包括：在室温条件下将纳米等离子共振芯片置于11-巯基十一烷酸溶液中，用乙醇清洗后以氮气吹干；加入400×10-3M 1-乙烷基-3-3-二甲基氨丙基碳化二亚胺和100×10-3M N-羟基丁二酰亚胺的1:1混合液中孵育；孵育结束后放入单克隆抗SARS-COV-2捕获抗体内于室温孵育，随后清洗后用吹干；加入牛血清白蛋白阻断液中室温孵育，去除牛血清白蛋白阻断液并加入乙醇胺溶液室温孵育，以覆盖未反应的NHS酯；随后用去离子水清洗后氮气吹干后放置于干燥环境中。

7.根据权利要求1或2所述的基于纳米等离子共振的新型冠状病毒颗粒定量检测方法，其特征在于，用SARS-COV-2标记抗体标记纳米金颗粒的方法包括：用K2CO3溶液调节纳米金颗粒溶液pH至SARS-COV-2标记抗体或ACE2蛋白的等电点，加入SARS-COV-2标记抗体或ACE2蛋白抗体，混匀后在室温孵育，然后加入终浓度为0.5-1.5％的牛血清白蛋白阻断液，在室温孵育；设置离心机转速为5000-9000rpm/min，离心25分钟，去除上清，用去离子水复溶。

8.根据权利要求1或2所述的基于纳米等离子共振的新型冠状病毒颗粒定量检测方法，其特征在于，SARS-CoV-2病毒颗粒与标记纳米金颗粒复合物的捕获包括：将SARS-COV-2病毒颗粒加入到SARS-COV-2病毒S-蛋白抗体或ACE2蛋白标记过的纳米金颗粒复溶液中，混匀后将混合物加入到覆盖了SARS-COV-2捕获抗体或蛋白的芯片孔板中，再将孔板放入酶标仪中震荡反应。