[发明专利]高产L-高丝氨酸的大肠杆菌基因工程菌、构建方法及菌株

权利要求书

1.高产L-高丝氨酸的大肠杆菌基因工程菌，由如下方法构建获得：

（1）将大肠杆菌E. coli W3110中metI、metJ、metB、thrB、metA和lysA基因敲除，并且过表达metL基因，构建得到菌株E. coli W3110 ΔmetI ΔmetJΔmetBΔthrBΔmetA ΔlysATrc-metL；

（2）以E. coli W3110 ΔmetI ΔmetJΔmetBΔthrBΔmetA ΔlysA Trc-metL为出发菌株，用来源于pTrc99A的trc启动子替换ppc基因的启动子，敲除iclR基因，构建得到菌株E. coli W3110 ΔmetI ΔmetJ ΔmetB ΔthrB ΔmetA ΔlysA ΔiclR Trc-metL Trc-ppc；

（3）将编码抗反馈抑制的丙酮酸羧化酶pyc突变基因、编码抗反馈抑制的天冬氨酸激酶Ⅰ和高丝氨酸脱氢酶融合蛋白的thrA突变基因和编码抗反馈抑制的天冬氨酸激酶Ⅲ的lysC突变基因导入菌株E. coli W3110 ΔmetI ΔmetJ ΔmetB ΔthrB ΔmetA ΔlysA ΔiclR Trc-metL Trc-ppc，构建得到菌株E. coli W3110 ΔmetI ΔmetJ ΔmetB ΔthrBΔmetA ΔlysA ΔiclR Trc-metL Trc-ppc/pACP；所述pyc突变基因的核苷酸序列如SEQID NO.13所示，thrA突变基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示，lysC突变基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示；

（4）将编码蔗糖转运蛋白的scrA基因、编码蔗糖-6-磷酸水解酶的scrB基因和编码果糖激酶的scrK基因导入E. coli W3110 ΔmetI ΔmetJ ΔmetB ΔthrB ΔmetA ΔlysA ΔiclR Trc-metL Trc-ppc/pACP，构建得到菌株E. coli W3110 ΔmetI ΔmetJ ΔmetB ΔthrB ΔmetA ΔlysA ΔiclR Trc-metL Trc-ppc/pACP/pSCR，即所述高产高丝氨酸的大肠杆菌基因工程菌；所述scrA基因核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述scrB基因核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述scrK基因核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

2.如权利要求1所述的大肠杆菌基因工程菌，其特征在于所述trc启动子核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。