[发明专利]一种Vimentin基因表达检测试剂盒

权利要求书

1.一种Vimentin基因表达检测试剂盒，其特征在于，包括针对检测Vimentin基因mRNA的捕获探针以及信号放大系统；所述信号放大系统包括有扩增探针和末端修饰有荧光基团的标记探针；其中，

所述捕获探针用于连接Vimentin基因mRNA与扩增探针，每条捕获探针上修饰有4～6个阳离子精胺单元，且从5’端到3’端的碱基组成依次为：能与Vimentin基因mRNA结合的特异性P1序列、间隔臂序列、P2序列；所述特异性P1序列的长度为18～20bp；所述P2序列的长度为24～26bp，且P2序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与P1和Vimentin基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列；

所述扩增探针连接捕获探针与标记探针，每条扩增探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：能与捕获探针的P2序列互补配对的P3序列、间隔臂序列、P4序列；所述P4序列的长度为24～26bp，且P4序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与P1、P2、P3和Vimentin基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列；

所述标记探针连接扩增探针与荧光基团，每条标记探针具有与相应扩增探针P4序列互补配对的P5序列，且末端修饰有荧光基团；

所述针对Vimentin基因mRNA的捕获探针的特异性P1序列的5’末端或3’末端修饰有4～6个阳离子精胺单元；

针对Vimentin基因mRNA的捕获探针中，特异性P1序列选自SEQ ID NO.1～SEQ IDNO.10中的5条或5条以上，P2序列为SEQ ID NO.21；

针对Vimentin基因mRNA的扩增探针中，P3序列为SEQ ID NO.23，P4序列为SEQ IDNO.25；

针对Vimentin基因mRNA的标记探针中，P5序列为SEQ ID NO.27。

2.根据权利要求1所述的Vimentin基因表达检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括针对内参基因mRNA的捕获探针以及信号放大系统；所述信号放大系统包括有扩增探针和末端修饰有荧光基团的标记探针；其中，

所述捕获探针用于连接内参基因mRNA与扩增探针，每条捕获探针上修饰有4～6个阳离子精胺单元，且从5’端到3’端的碱基组成依次为：能与内参基因mRNA结合的特异性P1序列、间隔臂序列、P2序列；所述特异性P1序列的长度为18～20bp；所述P2序列的长度为24～26bp，且P2序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与P1和内参基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列；

所述扩增探针连接捕获探针与标记探针，每条扩增探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：能与捕获探针的P2序列互补配对的P3序列、间隔臂序列、P4序列；所述P4序列的长度为24～26bp，且P4序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与P1、P2、P3和内参基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列；

所述标记探针连接扩增探针与荧光基团，每条标记探针具有与相应扩增探针P4序列互补配对的P5序列，且末端修饰有荧光基团，所述荧光基团与针对Vimentin基因mRNA的标记探针上修饰的荧光基团互不相同。

3.根据权利要求2所述的Vimentin基因表达检测试剂盒，其特征在于，所述针对内参基因基因mRNA的捕获探针的特异性P1序列的5’末端或3’末端修饰有4～6个阳离子精胺单元。

4.根据权利要求2或3所述的Vimentin基因表达检测试剂盒，其特征在于，所述内参基因为ACTB基因；针对ACTB基因mRNA的捕获探针中，特异性P1序列选自SEQ ID NO.11～SEQID NO.20中的5条或5条以上，P2序列为SEQ ID NO.22；针对ACTB基因mRNA的扩增探针中，P3序列为SEQ ID NO.24，P4序列为SEQ ID NO.26；针对ACTB基因mRNA的标记探针中，P5序列为SEQ ID NO.28。

5.根据权利要求1～4任一项所述的Vimentin基因表达检测试剂盒，其特征在于，所述间隔臂序列的长度为5～10个碱基。