[发明专利]一种Vimentin基因表达检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种Vimentin基因表达检测试剂盒，其包括针对检测Vimentin基因mRNA的捕获探针及信号放大系统；所述信号放大系统包括扩增探针和标记探针；其中，所述捕获探针用于连接Vimentin基因mRNA与扩增探针，每条捕获探针上修饰有4～6个阳离子精胺单元，且从5’端到3’端的碱基组成依次为：特异性P1序列、间隔臂序列、P2序列；所述扩增探针连接捕获探针与标记探针，且从5’端到3’端的碱基组成依次为：P3序列、间隔臂序列、P4序列；所述标记探针连接扩增探针与荧光基团，且具有P5序列，末端修饰有荧光基团。所述试剂盒通过检测探针的优化，有效增加捕获探针与目标mRNA的亲和力，提交杂交效率，使所述试剂盒具有杂交快速，杂交稳定性好、准确性高和检测效率高等优点。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种Vimentin基因表达检测试剂盒。

背景技术

Vimentin，即波形蛋白，是存在于间充质细胞中的一种主要的中间丝蛋白，是细胞骨架的必需成分之一，其基因定位于人类染色体10p13，包含10个外显子。Vimentin在不同的生理及病理状态下显现出复杂的生物学功能，如维持细胞完整性、调控细胞的黏附、迁移、细胞凋亡、上皮-间质转化(EMT)及血管生成等，并且参与创伤、感染、自身免疫及肿瘤侵袭转移等病理过程。研究表明，Vimentin在肺癌、胃肠道肿瘤、乳腺癌、恶性黑色素瘤等多种上皮型肿瘤中表达增加，其表达情况在肿瘤诊断和预后方面的研究也越来越多。在循环肿瘤细胞(CTCs)研究中，Vimentin常被作为间质型标志物，用于CTCs的分离与鉴定。有研究发现，转移性胃肠道间质瘤患者Vimentin⁺巨噬细胞样CTCs数量明显高于局部胃肠道间质瘤患者或无癌志愿者，Vimentin⁺巨噬细胞样CTCs可能作为预测胃肠道间质瘤患者转移风险的潜在生物标志物。另有研究发现，Vimentin⁺CTCs可在大多数胰腺导管腺癌患者中被检测到，以2个Vimentin⁺CTCs作为cut-off值可区分胰腺导管腺癌和健康者，Vimentin⁺CTCs数量与经切除术的患者的肿瘤负荷变化相关，对治疗有反应的患者在化疗后Vimentin⁺CTCs数量明显减少，术前较高的Vimentin⁺CTCs数量与较短的无复发生存期相关；表明Vimentin⁺CTCs可能是胰腺导管腺癌的潜在生物标志物。由此可见，Vimentin在CTCs中表达具有重要的临床价值。鉴于Vimentin表达在肿瘤发生发展、预后和治疗中的重要临床价值及其在CTCs研究中的重要意义，促使我们开发一种Vimentin基因表达检测试剂盒，有助于深入研究Vimentin基因表达在各种肿瘤发生发展、预后及治疗方面的临床意义。

目前常用的Vimentin表达检测方法是免疫组化法和实时定量PCR法。其中，免疫组化法检测样本为组织样本，需手术获取，同时尚未形成统一的操作技术标准和结果判断标准，限制了该方法的应用；而实时定量PCR法对实验条件的要求很严，每一个步骤都必须严格操作并避免污染，否则难以保证检测结果的准确性和可靠性。针对上述问题，中国专利CN201410228511.9提供了一种检测基因表达的RNA原位杂交方法，所述方法的检测探针可实现RNA原位检测的荧光信号放大，提高了检测的灵敏度和准确性，且检测样本可以为体液样本，应用范围广阔。但是进一步的研究发现，上述RNA原位杂交检测方法中检测探针与目标mRNA特异性结合的亲和力需要进一步提升。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种捕获探针与目标mRNA亲和力强、杂交效率高、准确率高的Vimentin基因表达检测试剂盒，通过原位杂交法检测生物样本中Vimentin基因的表达水平，提供临床相关辅助信息。

具体技术方案为：

一种Vimentin基因表达检测试剂盒，包括针对检测Vimentin基因mRNA的捕获探针以及信号放大系统；所述信号放大系统包括扩增探针和末端修饰有荧光基团的标记探针；其中，