[发明专利]肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物，其中，

所述磁微粒试剂为由抗异硫氰酸荧光素抗体包被的磁性微球；

所述抗试剂为由异硫氰酸荧光素标记的肌酸激酶同工酶抗体和由碱性磷酸酶标记的肌酸激酶同工酶抗体按照体积比1:1混合而成的溶液。

2.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述磁微粒试剂的制备步骤为：

步骤1：对粒径为0.5～3μm的磁微粒进行活化，室温下搅拌30～40min后在磁场中静置1～3min，之后吸出上清液，使用缓冲液清洗，并进行悬浮，获得浓度为20～60mg/mL的第一溶液；

步骤2：向所述第一溶液内加入羊抗异硫氰酸荧光素抗体，在37℃下搅拌2～5h后在磁场中静置2～6min，吸出上清液，之后加入缓冲液并在37℃下搅拌封闭2～6小时，获得第二溶液；

步骤3：使用缓冲液对所述第二溶液进行清洗3～5次，并用含有缓冲液配制成8～12mg/mL的磁性微球初溶液；

步骤4：使用缓冲液对所述磁性微球初溶液进行稀释，制成磁微粒试剂，所述磁微粒试剂的浓度为0.8～2.0mg/ml。

3.根据权利要求2所述的肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述磁微粒试剂的制备步骤1中使用的缓冲液为PH＝5.5～6.5的柠檬酸钠缓冲液、醋酸钠缓冲液、2-吗啉乙磺酸缓冲液中的一种或多种；和/或者：

所述磁微粒试剂的制备步骤2中的缓冲液为含有质量体积分数为1.0-2.0％酪蛋白、PH＝7～8的磷酸缓冲液；和/或者：

所述磁微粒试剂的制备步骤3中的缓冲液为体积分数为0.01-0.1％的表面活性剂、含质量体积分数为1.0-2.0％酪蛋白和0.01-0.05％防腐剂的磷酸缓冲液；和/或者：

所述磁微粒试剂的制备步骤4中的缓冲液为含体积分数为0.01-0.1％的表面活性剂、质量体积分数0.5-1.0％牛血清白蛋白、1.0-2.0％酪蛋白和0.01-0.05％防腐剂的磷酸缓冲液。

4.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述异硫氰酸荧光素标记的肌酸激酶同工酶抗体的制备步骤为：

使用缓冲液对需偶联的肌酸激酶同工酶抗体进行透析，制成肌酸激酶同工酶抗体溶液；

使用缓冲溶液对异硫氰酸荧光素进行溶解，制成异硫氰酸荧光素溶液，使异硫氰酸荧光素溶液的浓度为2-5mg/ml；

将质量比为100ug:1mg～200ug:1mg的肌酸激酶同工酶抗体溶液与异硫氰酸荧光素溶液混合均匀，并避光反应过夜，之后加NH₄Cl终止反应，制成混合溶液；

对所述混合溶液进行分离，之后使用抗试剂缓冲液进行稀释，得到浓度为1.5～3.0μg/ml的异硫氰酸荧光素标记的肌酸激酶同工酶抗体。

5.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记的肌酸激酶同工酶抗体的制备步骤为：

使用缓冲液对需偶联的肌酸激酶同工酶抗体进行透析，制成肌酸激酶同工酶抗体溶液；

使用缓冲溶液对碱性磷酸酶进行溶解，制成碱性磷酸酶溶液，使碱性磷酸酶溶液的浓度为2-4mg/ml；

将摩尔比为1:1～2:1的肌酸激酶同工酶抗体溶液和碱性磷酸酶溶液混合均匀，并加入赖氨酸溶液，反应过夜，制成混合溶液；

对所述混合溶液进行分离，之后使用抗试剂缓冲液进行稀释，得到浓度为1.0～2.0μg/ml的碱性磷酸酶标记的肌酸激酶同工酶抗体。

6.根据权利要求4或5所述的肌酸激酶同工酶磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述抗试剂缓冲液的组分及含量为：