[发明专利]一种马氏珠母贝生长性状相关的KSPI基因SNP分子标记及其应用在审
| 申请号： | 202010654443.8 | 申请日： | 2020-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN111676298A | 公开（公告）日： | 2020-09-18 |
| 发明（设计）人： | 杨创业;郝瑞娟;邓岳文;杜晓东;郑哲;王庆恒 | 申请（专利权）人： | 广东海洋大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6806;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州市南锋专利事务所有限公司 44228 | 代理人： | 李慧 |
| 地址： | 524000 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种马 珠母 生长 性状 相关 kspi 基因 snp 分子 标记 及其 应用 | ||
1.一种马氏珠母贝生长性状相关的KSPI基因SNP分子标记，其特征在于：所述的SNP分子标记位于马氏珠母贝Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂的g.38429470AT、g.38429512AG位点。
2.一种马氏珠母贝生长性状相关的KSPI基因SNP分子标记的应用，其特征在于：权利要求1所述的SNP分子标记应用于马氏珠母贝早期选育。
3.根据权利要求2所述的一种马氏珠母贝生长性状相关的KSPI基因SNP分子标记的应用，其特征在于：SNP分子标记位点的基因型对马氏珠母贝壳型性状进行早期选育。
4.根据权利要求3所述一种马氏珠母贝生长性状相关的KSPI基因SNP分子标记的应用，其特征在于：包括如下步骤：
(1)提取待测马氏珠母贝的基因组DNA；
(2)设计特异性扩增含有马氏珠母贝KSPI基因所在3号染色体上38429470-38429512位点的基因片段的引物对；
(3)以步骤(2)设计的引物对马氏珠母贝基因组DNA进行PCR扩增，检测扩增所得基因片段的SNP位点的基因型；
(4)基于SNP位点的基因型对马氏珠母贝壳型性状进行早期选育。
5.根据权利要求4所述一种马氏珠母贝生长性状相关的KSPI基因SNP分子标记的应用，其特征在于：所述PCR扩增的引物对的序列如SEQ ID。
6.根据权利要求4所述一一种马氏珠母贝生长性状相关的KSPI基因SNP分子标记的应用，其特征在于：步骤(1)所述的提取待测马氏珠母贝的基因组DNA的步骤如下：使用试剂盒提取基因组DNA，具体步骤包括：
(1)取0.05g闭壳肌，放入装有200μL缓冲液的高压灭菌过的1.5mL离心管；
(2)剪碎肌肉组织，加入4μL100 mg/mL核糖核酸酶A溶液，振荡15sec，室温放置5min；
(3)加入20μL 20mg/mL蛋白酶K溶液，涡旋混匀，简短离心，56℃放置3h，每小时振荡混合样品2-3次，每次振荡混匀15sec；
(4)加入200μL缓冲液，充分颠倒混匀，70℃放置10min，离心；
(5)加人200μL无水乙醇，充分颠倒混匀，简短离心；
(6)将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱中，12,000rpm离心30sec，倒掉废液，将吸附柱放回收集管中；
(7)向吸附柱中加入500μL缓冲液，12,000rpm离心30sec，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中；
(8)向吸附柱中加入600μL漂洗液，12,000rpm离心30sec，倒掉废液，将吸附柱放入收集管中；
(9)重复操作步骤7；
(10)将吸附柱放回收集管中，12,000rpm离心2min，倒掉废液，将吸附柱CB3置于室温放置10分钟；
(11)将吸附柱转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100μL洗脱缓冲液，室温放置5min，12,000rpm离心2min，将溶液收集到离心管中。
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