[发明专利]一种鲟鱼外周血白细胞的分离方法及其分离液

权利要求书

1.一种鲟鱼外周血白细胞的分离方法，其特征在于：包括如下步骤：将鲟鱼外周血加入白细胞分离液中离心，离心管内液体出现分层，由上至下分别为血浆层、白细胞富集层、白细胞分离液层和红细胞堆积层；收集白细胞富集层，得到鲟鱼外周血白细胞；

所述白细胞分离液的制备方法如下：将Percoll原液与质量分数为8.5％的NaCl水溶液按照体积比为9：1的比例混匀，得到100％的Percoll液，再将质量分数为0.85％的NaCl水溶液与100％的Percoll液按照总体积100，体积比为33～23：67～77的比例混匀，离心转速设置为400～800×g、离心时间设置为20～30min，得到白细胞分离液。

2.根据权利要求1所述的鲟鱼外周血白细胞的分离方法，其特征在于：所述鲟鱼外周血与白细胞分离液的体积比为2：1。

3.根据权利要求1所述的鲟鱼外周血白细胞的分离方法，其特征在于：所述鲟鱼外周血为鲟鱼抗凝外周血，鲟鱼抗凝外周血是将鲟鱼外周血与抗凝剂混匀得到的，鲟鱼抗凝外周血中的鲟鱼外周血与抗凝剂的体积比为1：1。

4.根据权利要求3所述的鲟鱼外周血白细胞的分离方法，其特征在于：所述抗凝剂为肝素钠溶液。

5.根据权利要求1所述的鲟鱼外周血白细胞的分离方法，其特征在于：收集白细胞富集层的方法为用移液器逐层吸取；具体方法如下：使用移液器吸取最上层的血浆层，弃血浆层，然后吸取白细胞富集层。

6.根据权利要求1所述的鲟鱼外周血白细胞的分离方法，其特征在于：质量分数为0.85％的NaCl水溶液与100％的Percoll液按照总体积100，体积比为28：72的比例混匀，离心转速设置为800×g、离心时间设置为20min，得到白细胞分离液。

7.根据权利要求1所述的鲟鱼外周血白细胞的分离方法，其特征在于：所述鲟鱼为杂交鲟。

8.一种如权利要求1-7中任意一项所述的鲟鱼外周血白细胞的分离方法中的分离液。