[发明专利]一种去氧胆酸类化合物的生物样品分析方法

权利要求书

1.一种去氧胆酸类化合物的生物样品分析方法，其特征在于，该分析方法包括以下步骤：

（1）标准曲线溶液配制

称取10.73 mg去氧胆酸类化合物对照品，置于100 ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀后配制成0.1073 mg/ml的标准溶液，再次加入乙腈稀释，配制成浓度分别为3，5，10，30，100，300，1000、2000 ng/mL的标准曲线溶液；

（2）质控溶液配制

称取10.94 mg去氧胆酸类化合物对照品，置于100 ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀后配制成0.1094 mg/ml的质控溶液，再次加入乙腈稀释，配制成浓度分别为5，10，1500 ng/mL的质控溶液；

（3）内标溶液配制

称取11.29 mg地西泮对照品，置于100 ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀后配制成0.1129 mg/ml的内标溶液，再次加入乙腈稀释，配制成浓度为100 ng/mL的内标溶液；

（4）生物样品前处理

取生物样品，加入重量：体积比为1g : 6 mL的生理盐水匀浆，取100 μL匀浆后的生物样品至1.5 mL EP管中，加入100μL浓度为100 ng/mL的地西泮内标溶液，混匀，加入300-500μL乙腈沉淀，涡旋2-3分钟混匀，4℃，13000-15000 rpm离心15-20分钟，取200 μL上清液进样；

（5）LC-MS/MS方法检测

通过LC-MS/MS方法检测，基于待测物与内标的峰面积比，通过归一化法得到标准曲线，从而定量得到生物样品中去氧胆酸类化合物的浓度，

LC-MS/MS方法的色谱及质谱条件如下：

色谱条件：液相型号为岛津 LC-20A；色谱柱为Agela Venusil XBP C-18；流动相A相为5mM 乙酸铵水溶液，流动相B相为0.1%甲酸乙腈溶液，A:B=15:85；

质谱条件：API 4000质谱ESI源，负离子，离子喷射电压为5500 V，温度570℃，雾化气压力为52 psi，解簇电压压力为58 psi，气帘气体压力为28 psi，扫描方式为多重反应监测；

所述去氧胆酸类化合物具有如下通式结构：

，

其中，

R¹为“-NR²R³取代的C₁~C₄烷基”、C₁₅~C₂₁烷基或C₁₅~C₂₁烯基；

R²为氢或C₁~C₁₀烷基，R³为氢或C₁~C₁₀烷基；或者，R²、R³及与它们相连接的N原子共同形成4~8元杂环基。

2.如权利要求1所述去氧胆酸类化合物的生物样品分析方法，其特征在于，所述生物样品选自受试者的血液或血清样品。