[发明专利]一种去氧胆酸类化合物的生物样品分析方法

说明书

本发明提供了一种去氧胆酸类化合物的生物样品分析方法，是通过高效、快速、灵敏的液相‑质谱联用系统(LC‑MS)方法对去氧胆酸类化合物进行分析。此方法采取了简单的有机溶剂蛋白沉淀法对生物样本进行前处理，基于待测物与内标的峰面积比，通过归一化法得到标准曲线，从而定量得到生物样品中去氧胆酸类化合物的浓度。本法为去氧胆酸类化合物在动物体内的药代动力学中去氧胆酸类化合物的检测提供了简便的分析方法。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种去氧胆酸类化合物的生物样品分析方法。

背景技术

法尼醇X受体(FXR)是一种核受体，是一种胆酸的传感器，可调控胆酸的合成和胆汁在肝内的流动，同时对于胆汁内环境稳定、脂质代谢、糖代谢以及炎症/免疫应答都有作用。

研究表明，鹅去氧胆酸的6位取代衍生物，是半合成的鹅去氧胆酸(CDCA)的衍生物，可激活法尼醇X受体(FXR)。6-α-乙基鹅去氧胆酸(6-ECDCA,OCA)对于FXR的激活作用是CDCA的100倍，临床研究表明，OCA可以用于治疗原发性胆汁性肝硬化(PBC)、门静脉高压(Portal hypertension)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、胆汁酸性腹泻(Bile aciddiarrhea)、酒精性肝炎、原发性硬化性胆管炎(PSC)等与胆汁分泌有关的疾病(DrugDiscovery Today.Volume 17,Numbers 17/18,2012)。然而，去氧胆酸类化合物(如CDCA、UDCA或OCA)，在pH值为1～8的环境下不溶于含水介质，具有极强的苦味，并且苦味持续数小时。CDCA和OCA的pKa值均为5，显弱酸性，在水中的溶解度很低，其中，CDCA在水中的溶解度约为32μM，而OCA为9μM(J.Pharmacol.Exp.Ther.July2014.350:56-68)。UDCA水中溶解度为53μM，并且只有当pH值达到8.47才会出现完全溶解，而当pH值小于8.4时，部分熊去氧胆酸不但不能被吸收，反而被肠道细菌菌落转化成石胆酸(US5380533)。而如中国专利CN108218946A所公开的去氧胆酸类化合物，能屏蔽奥贝胆酸的苦味或对胃肠道的刺激，水溶性好，生物利用度高，可在肠道中释放出奥贝胆酸，从而具备相同的药理活性、更佳的药代动力学性质。在制备预防和/或治疗与胆汁分泌有关的疾病如胆固醇性胆结石症、原发性胆汁性肝硬化、门静脉高压、非酒精性脂肪肝炎、胆汁酸性腹泻、酒精性肝炎、原发性硬化性胆管炎或动脉粥样硬化的药物中有着潜在的应用前景。然而目前去氧胆酸类化合物在生物样品中浓度的检测方法存在操作步骤复杂、分析周期长以及生物基质取材单一等问题。

发明内容

本发明针去氧胆酸类化合物在生物样品中浓度的检测方法存在操作复杂、分析周期长以及生物基质取材单一的问题，提供了一种去氧胆酸类化合物的生物样品分析方法。本检测方法操作简单，分析快速，而且能应用于多种不同的生物基质。

为了解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之一为：一种去氧胆酸类化合物的生物样品分析方法，该分析方法包括以下步骤：

(1)标准曲线溶液配制

称取10.73mg去氧胆酸类化合物对照品，置于100ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀后配制成0.1073mg/ml的标准溶液，再次加入乙腈稀释，配制成浓度分别为1-1000ng/mL的标准曲线溶液；

(2)质控溶液配制

称取10.94mg去氧胆酸类化合物对照品，置于100ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀后配制成0.1094mg/ml的质控溶液，再次加入乙腈稀释，配制成浓度分别为2，100，800ng/mL的质控溶液；

(3)内标溶液配制

称取11.29mg非诺贝特酸-d6对照品，置于100ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀后配制成0.1129mg/ml的内标溶液，再次加入乙腈稀释，配制成浓度为100ng/mL的内标溶液；

(4)生物样品前处理