[发明专利]一种血清中全氟及多氟化合物的高通量快速检测方法

权利要求书

1.一种血清中全氟及多氟化合物的高通量快速检测方法，其特征在于：采用96孔板进行检测，包括如下步骤：

（1）血清预处理，向采样的血清中加入十二烷基硫酸钠进行预处理；

离子对萃取，取经步骤（1）处理后的血清至96孔板进行甲基叔丁基醚离心萃取；

（3）超声萃取，对于步骤（2）萃取后的剩余溶液冷冻干燥再加入乙腈进行超声萃取；

（4）高通量净化，将步骤（2）得到的甲基叔丁基醚萃取液加入到PRiME HLB 96孔板，用步骤（3）得到的乙腈萃取液进行淋洗，氮吹甲醇定容后离心；

（5）取步骤（4）离心后得到的上清液至新的96孔板进行色谱-质谱检测。

2.根据权利要求1所述的一种血清中全氟及多氟化合物的高通量快速检测方法，其特征在于：所述步骤（1）具体为：取血清100 μL于96孔板中，加入 2 μL 5 %十二烷基硫酸钠（SDS），将96孔板放入水浴锅中，在95℃下反应2 min；后在4℃下以4000 rpm/min离心15min；离心后取出上清液于干净的96孔板中。

3.根据权利要求1所述的一种血清中全氟及多氟化合物的高通量快速检测方法，其特征在于：所述步骤（2）具体为：取预处理后的血清（100 μL）于96孔板中，依次加入300 μL碳酸钠缓冲溶液（0.25 moL、pH=10）和200 μL四丁基硫酸氢氨（TBAH，0.5 moL），再加入15 μL内标物，最后加入1 mL甲基叔丁基醚（MTBE）；将96孔板放入振荡仪中，在25℃下振荡30min；后在4℃下以4000 rpm/min离心15 min；离心后取出上清液于干净的96孔板中；向取出上清液后的孔板中再次加入1 mL的MTBE再次萃取，重复上述萃取步骤，取1 mL上清液放入上述步骤中干净的96孔板中，共收集到2 mL MTBE萃取溶液。

4.根据权利要求3所述的一种血清中全氟及多氟化合物的高通量快速检测方法，其特征在于：所述内标物为MPFACs-Mix。

5.根据权利要求1所述的一种血清中全氟及多氟化合物的高通量快速检测方法，其特征在于：所述步骤（3）具体为：将步骤（2）萃取后的剩余溶液进冷冻干燥1 h，再加入1 mL乙腈进行超声萃取，超声条件为40℃下超声30 min。

6.根据权利要求1所述的一种血清中全氟及多氟化合物的高通量快速检测方法，其特征在于：所述步骤（4）具体为：通过Waters Oasis PRiME HLB 96-well Plate净化，将2 mLMTBE溶液加入到新的PRiME HLB 96孔板中，氮吹至0.5 mL，加入1 mL乙腈萃取液进行淋洗，再加入0.5 mL乙腈淋洗，2次淋洗后共收集到2 mL的溶液在96孔板中，再次进行氮吹，氮吹至近干后用50 %的甲醇定容至100 μL，再以4000 rpm/min离心15 min，取50 μL上清液至新的96孔板中进行上机检测。

7.根据权利要求1所述的一种血清中全氟及多氟化合物的高通量快速检测方法，其特征在于：步骤（5）的具体方法如下：采用安捷伦高效液相色谱-串联质谱联用仪（HPLC-MS/MS），电喷雾电离源（ESI），选择多反应监测（MRM）下测定；扫描方式：负离子扫描；参数为：毛细管电压：3500 V；加电压（EMV）：300 V；干燥气流速：6.0 ml/min；干燥气温度：325℃；雾化气电压：30 psi；色谱柱：Agilent Eclipse Plus 95Å C18（2.1 mm × 50 mm，1.8 µm）；进样量：5 µL；柱温：40℃；流速：0.3 mL/min；流动相：A为10 mmol/L乙酸铵，B为乙腈；梯度洗脱程序：初始为70% A和30% B；0 ~ 6 min：70% ~ 20% A和30% ~ 80% B；6 ~ 8 min：20% ~70% A和80% ~ 30% B；后置时间为2 min。

8.根据权利要求1所述的一种血清中全氟及多氟化合物的高通量快速检测方法，其特征在于：血清采集收集方法如下：取静脉血3 mL于5 mL离心管中，在4℃下放置2 h后，以2000转/分钟的转速离心30 min，取血清1 mL于干净的2 mL离心管中备用，放在-80℃的冰箱中保存。