[发明专利]一种血清中全氟及多氟化合物的高通量快速检测方法

说明书

本发明涉及生物检测领域，具体是一种血清中全氟及多氟化合物的高通量快速检测方法。包括如下步骤（1）血清预处理，向采样的血清中加入十二烷基硫酸钠进行预处理；（2）离子对萃取，取预处理血清至96孔板进行甲基叔丁基醚离心萃取；（3）超声萃取，对于步骤（2）萃取后的剩余溶液冷冻干燥再加入乙腈进行超声萃取；（4）高通量净化，将步骤（2）得到的甲基叔丁基醚萃取液加入到PRiME HLB 96孔板，用步骤（3）得到的乙腈萃取液进行淋洗，氮吹甲醇定容后离心；（5）取步骤（4）离心后得到的上清液至新的96孔板进行色谱‑质谱检测。本发明具有高通量、低成本和快速等优点，可以高效的用于环境监测中对PFASs的检测。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，尤其涉及一种血清中全氟及多氟化合物的高通量快速检测方法。

背景技术

全氟及多氟类化合物(PFASs)是一类碳链上的氢原子被氟原子部分或全部取代的直链或支链有机化合物，由于具有优良的化学稳定性和表面活性，常作为添加剂广泛应用于灭火剂、润滑剂、涂料、洗护用品、感光材料表面处理剂、纺织品和皮革整理剂等领域。在全球范围内，PFASs污染非常普遍，研究表明在环境介质(大气、水体和土壤)、植物、动物及人体样本中均被广泛检出。而毒理学研究发现，PFASs具有生物累积性和潜在的生物毒性，可能导致肝脏毒性、神经毒性、生殖毒性、免疫毒性以及内分泌干扰效应等，对人体健康存在潜在威胁。因此，2009年《斯德哥尔摩公约》将全氟辛烷磺酸(PFOS)及其盐类和全氟辛烷磺酰氟(PFOSF)列为持久性有机污染物(POPs)，从而被限制生产和使用。随着PFOS的禁用，各种新型的PFASs逐渐成为重要的工业替代品。其中，氯代多氟烷基醚磺酸盐(F-53B)和全氟壬烯氧基苯磺酸钠(OBS)是我国两种重要的PFOS替代品。但是目前在血清中这些新型的替代品还并没有建立完善的检测方法。因此，建立一套能够快速检测血清中PFASs的方法就显得尤为迫切。

中国专利《一种全自动在线检测血清中全氟及多氟化合物的系统》公开号：105510483B，公开了一种全自动在线检测血清中全氟及多氟化合物的系统，具体步骤为：1、将血清样品正向加载到净化柱，并对分析柱进行冲洗；2、在血清样品加载完成后，对净化柱反冲洗脱目标化合物，并对分析柱进样；3、将样品引入质谱检测仪，实现对血清中全氟化合物的检测；4、在血清样品洗脱结束后，再冲洗净化柱，实现对净化柱的再生。该技术提供一种快速检测人体血清中全氟及多氟化合物的方法，但是该方法对检测仪器设备要求较高，虽然节约人工成本，但是明显增加了检测仪器的采购、使用和维护成本。

发明内容

针对上述问题，为满足血清样本中PFASs的高通量、快速、低成本检测方法，本发明开发一种血清中全氟及多氟化合物的高通量快速检测方法。具体技术方案如下：

采用96孔板进行检测，包括如下步骤：

(1)血清预处理，向采样的血清中加入十二烷基硫酸钠进行预处理；

(2)离子对萃取，取经步骤(1)预处理后的血清至96孔板进行甲基叔丁基醚离心萃取；

(3)超声萃取，对于步骤(2)萃取后的剩余溶液冷冻干燥再加入乙腈进行超声萃取；

(4)高通量净化，将步骤(2)得到的甲基叔丁基醚萃取液加入到PRiME HLB 96孔板，用步骤(3)得到的乙腈进行淋洗，氮吹甲醇定容后离心；

(5)取步骤(4)离心后得到的上清液至新的96孔板进行色谱-质谱检测。

进一步的，所述步骤(1)具体为：取血清100μL于96孔板中，加入2μL 5％十二烷基硫酸钠(SDS)，将96孔板放入水浴锅中，在95℃下反应2min；后在4℃下以4000rpm/min离心15min；离心后取出上清液于干净的96孔板中。