[发明专利]一种直接质谱鉴定含氨基代谢物同分异构体的方法及其应用

权利要求书

1.一种直接质谱鉴定含氨基代谢物同分异构体的方法，其特征在于具体包含以下步骤：

(1)氨基代谢物衍生化反应：将氨基代谢物配制为氨基代谢物标准溶液，然后加入衍生试剂溶液进行衍生化反应，将所得混合物浓缩后往残留液中加酸调节pH值到2～3，除盐处理后即可制得氨基代谢物衍生化产物；所述衍生试剂的表达式为DIPP-R-NHS，其中，DIPP代表N-二异丙基磷酸基，NHS代表N-羟基琥珀酰亚胺酯，R代表为含同位素标记或不含同位素的L-构型或D-构型的氨基酸，所述氨基酸选自丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸或苯丙氨酸中的一种；

(2)氨基代谢物衍生化产物检测：将步骤(1)中制得的氨基代谢物衍生化产物加溶剂制成重悬浮液，然后将所得重悬浮液稀释后即可进行质谱进样检测；

质谱分析条件：正离子模式，离子源为ESI；喷雾温度为280-380℃；喷雾电压为2.8-4.5kV；鞘气和辅助气体流量分别为60和10单位；轨道阱入口温度为280-380℃；毛细管温度为280-380℃；S-lens RF为30-50％；样品分析质量扫描范围为m/z 80-1500；质谱仪操作依据数据模式自动进行MS和MS/MS扫描，通过HCD碎片化分离得到10-50个丰度最高的前体离子进行分析鉴定。

2.根据权利要求1所述的直接质谱鉴定含氨基代谢物同分异构体方法，其特征在于，步骤(1)中所述的氨基代谢物选自亮氨酸和异亮氨酸、丙氨酸和β-丙氨酸、天冬氨酸和亚氨基二乙酸组成的含氨基代谢物的同分异构体中的一组；所述的氨基代谢物标准溶液由10-100mM碳酸氢钠溶液(其他碱性缓冲溶液也可，优选50mM碳酸氢钠溶液)制成，溶液pH值为8-10。

3.根据权利要求1所述的直接质谱鉴定含氨基代谢物同分异构体方法，其特征在于，步骤(1)中所述的衍生化反应条件为冰浴反应10min以上，然后常温反应10min以上。

4.根据权利要求1所述的直接质谱鉴定含氨基代谢物同分异构体方法，其特征在于，步骤(1)中所述的调节pH值的酸为甲酸、乙酸或盐酸溶液。

5.根据权利要求1所述的直接质谱鉴定含氨基代谢物同分异构体方法，其特征在于，步骤(2)中所述的重悬浮液为乙腈或甲醇溶液。

6.如权利要求1所述的直接质谱鉴定含氨基代谢物同分异构体方法在细胞氨基代谢物同分异构体的鉴定中的应用。

7.如权利要求1所述的直接质谱鉴定含氨基代谢物同分异构体方法在动物组织氨基代谢物同分异构体的鉴定中的应用。

8.如权利要求1所述的直接质谱鉴定含氨基代谢物同分异构体方法在动物血清氨基代谢物同分异构体的鉴定中的应用。

9.如权利要求1所述的直接质谱鉴定含氨基代谢物同分异构体方法在植物组织氨基代谢物同分异构体的鉴定中的应用。