[发明专利]一种直接质谱鉴定含氨基代谢物同分异构体的方法及其应用

说明书

本发明公开了一种直接质谱鉴定含氨基代谢物同分异构体的方法，包含以下步骤：氨基代谢物衍生化反应：将氨基代谢物配制为氨基代谢物标准溶液，然后加入衍生试剂溶液进行衍生化反应制得氨基代谢物衍生化产物；氨基代谢物衍生化产物检测：将制得的氨基代谢物衍生化产物加溶剂制成重悬浮液，然后将所得重悬浮液稀释后即可进行质谱进样检测；质谱分析条件：正离子模式，离子源为ESI；质谱仪操作依据数据模式自动进行MS和MS/MS扫描，通过HCD碎片化分离得到10‑50个丰度最高的前体离子进行分析鉴定。本发明首次将N‑二异丙基磷酸基‑L‑丙氨酸‑N‑羟基琥珀酰亚胺酯应用到同分异构体的鉴定，该方法鉴定氨基代谢物同分异构体具有较高的准确性和广泛的适用性。

技术领域

本发明属于氨基代谢物同分异构体鉴定领域，具体涉及一种直接质谱鉴定含氨基代谢物同分异构体的方法及其应用。

背景技术

含氨基代谢物是指含有氨基的小分子代谢物，包括氨基酸、多肽、神经递质及多胺等，涉及到生命活动中多种代谢途径。在代谢组学的研究中，对复杂生物样品中的含氨基代谢物进行定性定量分析具有重要的意义^[1,2]。由于含氨基代谢物包括氨基、甲基、羧基等官能团，这类物质存在同分异构体的现象，增加了在复杂生物样品中检测的难度。

目前，同分异构体的检测方法包括色谱法、光谱法和质谱法^[3]。色谱法前处理复杂、操作繁琐，而光谱法难以实现在复杂样品中进行同分异构体的鉴别。常规的单级质谱不能区分异构体，而二级质谱碎片对于结构稳定、碎片离子相同的同分异构体无法鉴定。离子淌度质谱能根据化合物空间结构上的差异，通过独有的离子淌度功能区分同分异构体，但是离子淌度质谱仪器昂贵，目前还没有普及使用^[4,5]。

物质衍生化后由于衍生化基团的加入能丰富同分异构体二级碎片离子，通过对比离子的特征碎片，为区分同分异构体提供了一种检测鉴定方法^[6,7]。

参考文献：

1.Johnson,D.W.Free amino acid quantification by LC-MS/MS usingderivatization generated isotope-labelled standards.J Chromatogr B.2011,879,1345–1352.

2.Li,S.W.；Balazs K.；Lieve B.；Filip C.；Frederic L.；Frank.V.Quantitative metabolite profiling of an amino group containingpharmaceutical in human plasma via precolumn derivatization and high-performance liquid chromatography-inductively coupled plasma massspectrometry.Anal.Chem.2017,89(3),1907-1915.

3.Zhang A.H.；Sun H.；Wang P.；Han Y.；Wang X.J.Modern analyticaltechniques in metabolomics analysis.Analyst,2012,137(2),293-300.

4.Dodds J.N；Baker E.S.Ion mobility spectrometry:fundamental concepts,instrumentation,applications,and the road ahead.J.Am.Soc.Mass.Spectr.2019,30(11),2185-2195.