[发明专利]一种利用玉米蛋白粉酶法定向制备LPP三肽的方法

说明书

本发明提供了一种利用玉米蛋白粉酶法定向制备LPP三肽的方法，包括以下步骤：玉米蛋白粉的预处理、分散；碱性蛋白酶水解；风味蛋白酶和木瓜蛋白酶水解；外切蛋白酶水解；水解产物离心后超滤，经大孔树脂吸附脱苦脱色，真空冷冻干燥得到富含LPP三肽的水解物冻干粉。本发明的制备方法可以实现LPP的定向释放，不仅增加了水解物中LPP的含量，还大大提高了酶解过程的蛋白质回收率；本发明还采用大孔吸附树脂对玉米蛋白粉水解物进行脱苦脱色处理，且效果明显，有效解决了玉米蛋白粉水解物颜色深、苦味强的问题。本发明的技术方案对于开发新型的降血压功能食品补充剂、提高玉米蛋白粉的综合利用程度具有重要意义。

技术领域

本发明属于蛋白质水解技术领域，具体涉及一种利用玉米蛋白粉酶法定向制备LPP三肽的方法。

背景技术

血管紧张素转化酶抑制肽（ACEIP）又称降血压肽，是由蛋白酶水解动植物蛋白而获得的一类具有血管紧张素转化酶（ACE）抑制活性和降血压作用的肽类。与现有的合成ACE抑制剂类降血压药物相比，ACEIP具有降血压效果温和、安全性高、无副作用、对正常血压无影响等显著优点，且可以通过日常饮食摄入，因此是一类理想的天然降血压功能性成分。到目前为止已根据体外ACE抑制活性分离鉴定出了大量ACEIP，但ACEIP极易被胃肠道及血液中的蛋白酶和肽酶水解而失去原先的结构和活性，目前经过临床验证对人体具有体内降血压功效的ACEIP仅有Ile-Pro-Pro（IPP）、Val-Pro-Pro（VPP）和Leu-Pro-Pro（LPP）三种。

IPP、VPP和LPP的主要来源是牛奶中的酪蛋白，因此被合称为乳三肽，其中IPP位于β-酪蛋白的74-76位和κ-酪蛋白的84-86位、VPP位于β-酪蛋白的108-110位、LPP位于β-酪蛋白的151-153位。这三种三肽对ACE具有很强的抑制活性，而且对胃肠道和血液中的蛋白酶和肽酶具有很强的抗性，因而能被完整吸收进入血液循环；乳三肽可以有效降低高血压患者的血压，并且不影响正常血压，因此具有很高的安全性。目前乳三肽的唯一来源是酪蛋白且市面上已有基于乳三肽的降血压功能食品上市，因此寻找酪蛋白外乳三肽的新来源对于开发新型的降血压功能食品具有重要意义。

玉米蛋白粉是玉米淀粉加工产业的副产物，其主要成分为玉米醇溶蛋白（α、β、γ、δ）。玉米蛋白粉的γ-醇溶蛋白中Pro含量高达26个/100个氨基酸残基；其中的三个组分均含有至少由6个Pro-Pro-Pro-Val-His-Leu（PPPVHL）重复单位组成的串联重复序列，其LPP的含量远高于乳三肽在β-酪蛋白和κ-酪蛋白中的出现频率；另外，LPP还存在于玉米蛋白粉的α-玉米醇溶蛋白及其它蛋白组分中，因此玉米蛋白粉是LPP的良好来源。如果能够将LPP从玉米蛋白粉中定向释放出来，这对于寻找乳三肽除酪蛋白外的新来源、提高玉米蛋白粉的综合利用价值具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用玉米蛋白粉酶法定向制备LPP三肽的方法。本发明通过多种蛋白酶水解玉米蛋白粉而制得富含LPP三肽的水解物，该制备方法的蛋白质回收率高，得到的LPP三肽含量高。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明提供了一种利用玉米蛋白粉酶法定向制备LPP三肽的方法，包括以下步骤：

（1）将玉米蛋白粉研磨过筛后，将粉末悬浮于水中，加入α-淀粉酶酶解，再经洗涤、高温蒸煮后得到预处理的玉米蛋白粉；

（2）将预处理的玉米蛋白粉分散在水中，得到的玉米蛋白质悬浊液调节pH值后，加入碱性蛋白酶混合水解，水解完成后经高温灭酶得到初水解液；

（3）将初水解液调节pH值至中性后，加入风味蛋白酶和木瓜蛋白酶混合恒温水浴水解，待水解完成，再加入外切蛋白酶混合水解，外切蛋白酶水解完成后经高温灭酶得到粗水解液；