[发明专利]一种布鲁氏菌蛋白抗原及其原核表达方法和应用

说明书

本发明属于基因工程技术领域，特别是涉及一种布鲁氏菌蛋白及其原核表达方法和应用。本发明采用原核表达载体构建包含抗原蛋白BAB的编码基因的重组载体，实现了抗原蛋白BAB的原核表达，方法简单易行，获得的表达产物在纯化后不经任何处理即具有明显的免疫效果，为布鲁氏菌诊断方法及iELISA诊断试剂盒的建立提供基础。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，特别是涉及一种布鲁氏菌蛋白抗原及其原核表达方法和应用。

背景技术

布鲁菌病(布病)是由布鲁氏菌引起的以流产和发热为特征的人兽共患病，严重地威胁着人和多种动物的生命健康，对农业生产和公共卫生造成了巨大的威胁。布鲁氏菌具有内寄生的特性，因此被感染的人或动物一般需要接受长时间的抗生素治疗，而且往往会留下严重后遗症。

反刍动物和猪对布鲁氏菌高度易感。布鲁氏菌特征性地侵害其生殖器官并导致母畜流产和不孕。当患病母畜分娩时，胎盘组织中布鲁氏菌达到极高数量，每克组织中细菌数可高达1014个，因此母畜流产是该病的传染性病症。在世界卫生组织(WHO)实验室生物安全手册中，布鲁氏菌被列为Ⅲ类危险级。布鲁氏菌病易传播给人，引起急性发热性疫病(波浪热)，可进一步发展成慢性型，引起肌肉-骨骼系统、心血管系统和中枢神经系统的严重并发症。本病流行区域应采取预防措施，防止人感染。职业性接触是常见的感染原因，口腔、呼吸道和结膜是基本感染途径。

布鲁菌是一种兼性胞内寄生菌，感染人畜后可在宿主体内建立慢性感染且难以被彻底清除，布鲁菌被认为缺乏病原菌所具有的经典毒力因子，因此对毒力基因的鉴定和研究对阐述其致病机制有着重要的意义。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的首要发明目的在于提供一种编码布鲁氏菌蛋白抗原的基因序列。

本发明的第二发明目的在于提供一种布鲁氏菌蛋白抗原的重组载体。

本发明的第三发明目的在于提供布鲁氏菌蛋白抗原的原核表达的方法。

本发明的第四发明目的在于提供该布鲁氏菌蛋白抗原的应用。

为了实现本发明的发明目的，采用的技术方案为：

本发明涉及一种编码布鲁氏菌蛋白抗原的基因序列，所述基因序列的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

本发明还涉及一种布鲁氏菌蛋白抗原的重组载体，所述重组载体中包含如SEQ IDNo.1所示的基因序列。

本发明还涉及一种布鲁氏菌蛋白抗原的原核表达的方法，至少包括以下步骤：

(1)扩增编码布鲁氏菌蛋白抗原的基因序列，所述基因序列的核苷酸序列如SEQID No.1所示，

(2)构建重组载体：将含有SEQ ID No.1所示核苷酸序列的PCR扩增产物连接到pMD19-T克隆载体中，构建得到重组质粒pMD19-BAB；分别酶切重组质粒pMD19-BAB和原核表达载体pET-30a(+)，构建得到包含BAB的编码基因的重组载体pET30-BAB；

(3)表达重组载体pET30-BAB：将重组载体pET30-BAB转化至BL21菌株中，利用IPTG诱导后收集包含BAB的细菌，经离心、纯化得到所述布鲁氏菌蛋白抗原。

可选的，在步骤(1)中，扩增编码布鲁氏菌蛋白抗原的基因序列的引物如SEQ IDNo.2、SEQ ID No.3所示。

可选的，在步骤(3)中，采用含尿素和咪唑的PBS重悬液处理离心破碎后的细胞菌液，离心并收集沉淀，获得沉淀重悬液；采用梯度离心法纯化所述沉淀重悬液，获得纯化后的抗原蛋白。

本发明还涉及一种由本发明的基因序列编码、或由本发明所述的方法制备得到布鲁氏菌蛋白抗原。