[发明专利]一种小样品冰冻断面快速成像方法

说明书

本发明公开了一种小样品冰冻断面快速成像方法，包括以下步骤：S1：对摄影平台进行搭建；S2：根据样品尺寸选取合适包埋框，并在包埋框内填充聚乙二醇饱和溶液；S3：将样品置入包埋框中，并根据拍摄断面情况对样品进行放置；S4：将包埋框浸入液氮罐内，待样品完全冰冻后取出，将冰冻后的样品通过聚乙二醇饱和溶液固定设置于冰冻切片机内的样品托上，本发明技术门槛低、容易推广，可单人操作，切片成像一气呵成、3s内可完成一个切片成像周期，可在半小时内完成从样品制备到断面成像的整个过程，并且通过摄影平台的搭建，可对样品断面进行清晰连续成像，获取肉眼不能看到的细节，并且通过为断面图像进行编号，可方便后期的查阅。

技术领域

本发明属于冰冻切片技术领域，具体涉及一种小样品冰冻断面快速成像方法。

背景技术

形态学研究通常有解剖、组织切片等常规研究，各有特点，解剖可显示肉眼可见立体结构，组织切片可借助显微镜显示组织平面形态，介于解剖及组织切片之间常用的是借助于电磁波的CT技术，CT扫描的是连续断层，但可以借此合成生物体的立体结构。

形态学研究中最常用的为冰冻切片和石蜡切片，其中冰冻切片主要目的是在尽量短的时间内获取薄片标本，通常作为石蜡切片的辅助诊断技术。

但冰冻切片的实质也是断层，和CT技术类似，一层层的将组织切去，也一层层的显示新的断层，这种技术实质类似CT，但和CT不同，断层是完全暴露出来的，借助于这完全暴露的断层，可以采用最简单的微距摄影将其连续成像。

借助于数码成像技术的突飞猛进，国内外对连续冰冻断层有断断续续的研究，但该技术目前尚未有较广泛的应用，原因,其一是成像效果不佳，其二是与所需设备不易获得，操作步骤较为繁杂。

发明内容

本发明的目的在于提供一种小样品冰冻断面快速成像方法，以解决上述的技术问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种小样品冰冻断面快速成像方法，包括以下步骤：

S1：对摄影平台进行搭建；

S2：根据样品尺寸选取合适包埋框，并在包埋框内填充聚乙二醇饱和溶液；

S3：将样品置入包埋框中，并根据拍摄断面情况对样品进行放置；

S4：将包埋框浸入液氮罐内，待样品完全冰冻后取出；

S5：在-15℃～-25℃的条件下，将冰冻后的样品通过聚乙二醇饱和溶液固定设置于冰冻切片机内的样品托上；

S6：对样品进行粗切，并露出样品平面；

S7：利用摄影平台对粗切后的样品进行精确对焦；

S8：利用冰冻切片机对样品进行逐层切片，并利用摄影平台逐层拍摄断面图像；

S9：对断面图像进行集合形成数据集，并以切片顺序为断面图像进行编号。

优选的，所述步骤S1中摄影平台搭建，包括以下步骤：

S11：设置环形闪光灯，并连接环形闪光灯电源；

S12：安装三脚架，并在三脚架顶部设置三维云台；

S13：将照相机设置于三维云台，并安装快门线。

优选的，所述步骤S2中聚乙二醇饱和溶液在冷冻过程中会进行收缩。

优选的，所述步骤S3中样品放置方向根据所需拍摄断面为冠状面、矢状面或横切面进行决定。

优选的，所述步骤S4中样品应置于液氮液面下，浸泡时间为1分钟。

优选的，所述步骤S4中样品在浸泡过程中应保持晃动。