[发明专利]一种检测非洲猪瘟病毒的crRNA以及试剂盒在审
| 申请号： | 202010662810.9 | 申请日： | 2020-07-10 |
| 公开（公告）号： | CN111647605A | 公开（公告）日： | 2020-09-11 |
| 发明（设计）人： | 唐小春;彭小唤;焦虎平;逄大欣;欧阳红生 | 申请（专利权）人： | 吉林大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12Q1/70;C12Q1/6818;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385 | 代理人： | 李正 |
| 地址： | 130000 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 非洲 猪瘟 病毒 crrna 以及 试剂盒 | ||
1.一种检测非洲猪瘟病毒的crRNA，其特征在于，所述crRNA为引导CRISPR-Cas12a特异性结合非洲猪瘟靶标DNA的crRNA。
2.根据权利要求1所述的crRNA，其特征在于，所述crRNA的核苷酸序列包括SEQ IDNo.1～SEQ ID No.30中的一种。
3.一种检测非洲猪瘟病毒DNA的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的crRNA、CRISPR-Cas12a和ssDNA荧光探针。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述ssDNA荧光探针两端分别连接荧光基团和荧光猝灭基团。
5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述ssDNA荧光探针的核苷酸序列如SEQID No.32所示。
6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述crRNA的使用浓度为200～300nmol/L。
7.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述CRISPR-Cas12a的使用浓度为150～250nmol/L。
8.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述ssDNA荧光探针的使用浓度为150～250nmol/L。
9.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括检测缓冲液，所述检测缓冲液以水为溶剂，包括以下浓度组分：15～25mmol/L的Tris-HCL，80～120mmol/L的KCL，4～6mmol/L的MgCl2，0.8～1.2mmol/L的DTT，4～6％甘油(体积比)和45～55μg/ml的肝素。
10.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述ssDNA荧光探针替换为DNA纳米金探针，所述DNA纳米金探针在DNA巯基处修饰纳米金；所述DNA纳米金探针的核苷酸序列如SEQ ID No.37-39所示。
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