[发明专利]基于磁微粒化学发光第四代艾滋病病毒检测试剂盒的制备

权利要求书

1.基于磁微粒化学发光第四代艾滋病病毒检测试剂盒的制备，其特征在于：包括以下步骤：

S1、生物活性原材料与磁微粒的偶联包被；

S2、包被有抗原抗体磁微粒用量的确定；

S3、阴阳性对照品的调试；

S4、检测HIV酶1和酶2的用量；

S5、免疫反应的加入量确定；

S6、免疫结合反应温度与时间的确定；

S7、洗孔体积与洗孔次数的确定。

2.根据权利要求1所述的基于磁微粒化学发光第四代艾滋病病毒检测试剂盒的制备，其特征在于：所述步骤1中通过乙二胺四乙酸偶联技术，将抗原抗体生物活性原材料包被于磁微粒。

3.根据权利要求1所述的基于磁微粒化学发光第四代艾滋病病毒检测试剂盒的制备，其特征在于：所述步骤2中通过考察磁微粒不同稀释比例来确定具体使用量。

4.根据权利要求1所述的基于磁微粒化学发光第四代艾滋病病毒检测试剂盒的制备，其特征在于：所述步骤3中阴阳性对照品的调试具体为：采用多份HIV阴性血清，均匀配制成阴性对照品，采用HIV抗体阳性原料，经灭活后，用稀释液做适当稀释，混合均匀配制成阳性对照品，将配制的产品对照品与国家参考品或经国家参考品标化的企业参考品同时进行检测，来判定阴阳性对照品是否合格。

5.根据权利要求1所述的基于磁微粒化学发光第四代艾滋病病毒检测试剂盒的制备，其特征在于：所述步骤4中检测HIV酶1和酶2的用量，具体如下：

1)检测HIV酶1:Biotin-P24多抗在免疫反应中与样本中的抗原结合，根据临床需要，检测HIV酶1的用量应能满足强阳性的检测，通过比较不同HIV酶1用量比例，阳性RLU/阴性RLU较高值为使用比例；

2)检测HIV酶2:HRP-HIV-1抗原、HRP-HIV-2抗原、SA-HRP在免疫反应中与样本中的抗原或抗体结合，根据临床需要，检测HIV酶2的用量应能满足强阳性样本的检测，通过比较不同HIV酶2用量比例，阳性RLU/阴性RLU较高值为使用比例。

6.根据权利要求1所述的基于磁微粒化学发光第四代艾滋病病毒检测试剂盒的制备，其特征在于：所述步骤5中免疫反应的加入量确定，具体如下：

1)采用两步夹心法定性检测人血清中的HIV抗原抗体,检测中参与反应的是HIV-1P24单克隆抗体和重组HIV抗原来分别捕获样本中的HIV-1P24抗原及HIV-1型、HIV-2型抗体；

2)在检测时第一步加入检测HIV酶1各252L/孔，待测样本752L/孔，第二步加入检测HIV酶2各1002L/孔，确定样本每孔加入量。

7.根据权利要求1所述的基于磁微粒化学发光第四代艾滋病病毒检测试剂盒的制备，其特征在于：所述步骤6中免疫结合反应温度与时间的确定，具体如下：

1)温度：

由于抗体、抗原是有活性的生物物质，温度超过一定的范围就会失去活性，通过试验在较小的范围内选择最适宜的孵育温度；

2)第一步反应时间：

实验时，各条件与前面相同，在37℃恒温温育，考察不同第一步温育时间，第二步统一温育时间，比较强阳性样本的RLU值；

3)第二步反应时间：

实验时，各条件与前面相同，在37℃恒温温育，第一步统一温育时间，考察不同第二步温育时间，比较强阳性样本的RLU值。

8.根据权利要求1所述的基于磁微粒化学发光第四代艾滋病病毒检测试剂盒的制备，其特征在于：所述步骤7中洗孔体积与洗孔次数的确定，具体为：先固定洗管3次，通过改变每次注液体积，观察洗管效果。