[发明专利]基于磁微粒化学发光第四代艾滋病病毒检测试剂盒的制备

说明书

本发明提供基于磁微粒化学发光第四代艾滋病病毒检测试剂盒的制备，涉及艾滋病病毒检测技术领域。该基于磁微粒化学发光第四代艾滋病病毒检测试剂盒的制备，包括以下步骤：S1、生物活性原材料与磁微粒的偶联包被；S2、包被有抗原抗体磁微粒用量的确定；S3、阴阳性对照品的调试；S4、检测HIV酶1和酶2的用量；S5、免疫反应的加入量确定；S6、免疫结合反应温度与时间的确定；S7、洗孔体积与洗孔次数的确定。本发明，通过将HIV‑1和HIV‑2抗原以及HIVP24单抗包被于磁微粒表面，能够同时检测HIV抗原和抗体，与第三代HIV检测试剂盒检测窗口期22天，可大大缩短窗口期为8‑10天，与HIV金标准核酸检测相差不多。

技术领域

本发明涉及艾滋病病毒检测技术领域，具体为基于磁微粒化学发光第四 代艾滋病病毒检测试剂盒的制备。

背景技术

化学发光主要分为板式化学发光法和磁微粒化学发光法，国外用的是磁 微粒管式化学发光，国内采用的是板式化学发光，在检测结果方面，板式精 密度为5％-7％，线性范围100-500倍，可批量操作，出结果需要1.5小时左右。 然而，磁微粒式化学发光则精密度更高，变异1％-2％，线性范围宽，有一千到 一万倍，检测结果只需二十到三十分钟，自动化程度更高，检测结果更快， 适用于临床急诊。

目前我国绝大部分产品还是采用板式化学发光法检测HIV抗体，即第三 代产品，虽然其包被HIV(1+2型)抗原，并且使用双抗原夹心法，可检测HIV 不同的抗体亚类。灵敏度、特异性均较高，但其检测HIV病毒的窗口期仍有 22天。第四代产品是将HIV抗原和抗HIVp24抗体同时包被载体，可同时检测 样品中的HIVp24抗原和HIV抗体，因此该类试剂可以检出HIVp24抗原阳性 但抗体还未阳转的HIV感染的窗口期样品。第四代HIV抗体和抗原联合检测 试剂用于血液筛查可发现HIV感染窗口期样品，减少HIV传播的风险。中国 专利文献CN201410466445.9《一种人类免疫缺陷病毒抗原抗体联合检测试剂 盒及其制备方法和应用》虽然提供了通过抗原抗体联合检测的思路，但其抗 原抗体是包被在微孔板固定相上，这就限制了这种试剂盒的精密度、变异系 数以及检测结果时间都不如磁微粒流动性系统。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了基于磁微粒化学发光第四代艾滋病 病毒检测试剂盒的制备，解决了现有技术中存在的缺陷与不足。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：基于磁微粒化学 发光第四代艾滋病病毒检测试剂盒的制备，包括以下步骤：

S1、生物活性原材料与磁微粒的偶联包被；

S2、包被有抗原抗体磁微粒用量的确定；

S3、阴阳性对照品的调试；

S4、检测HIV酶1和酶2的用量；

S5、免疫反应的加入量确定；

S6、免疫结合反应温度与时间的确定；

S7、洗孔体积与洗孔次数的确定。

优选的，所述步骤1中通过乙二胺四乙酸偶联技术，将抗原抗体生物活 性原材料包被于磁微粒。

优选的，所述步骤2中通过考察磁微粒不同稀释比例来确定具体使用量。

优选的，所述步骤3中阴阳性对照品的调试具体为：采用多份HIV阴性 血清，均匀配制成阴性对照品，采用HIV抗体阳性原料，经灭活后，用稀释 液做适当稀释，混合均匀配制成阳性对照品，将配制的产品对照品与国家参 考品或经国家参考品标化的企业参考品同时进行检测，来判定阴阳性对照品 是否合格。

优选的，所述步骤4中检测HIV酶1和酶2的用量，具体如下：