[发明专利]一种金钗石斛花的HPLC指纹图谱构建方法

说明书

本发明涉及一种黔产道地金钗石斛花HPLC指纹图谱的构建方法，包括供试品溶液的制备，色谱条件的选择，并用高效液相色谱仪进行检测，得到黔产金钗石斛花的指纹图谱。其中色谱条件为：色谱柱为AgilentSB‑C₁₈(250×4.6mm，5μm)，以乙腈‑0.1％磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，检测波长为254nm，流速为0.8m L/min，柱温：30℃，进样量10μL，使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对样品指纹图谱进行分析，确定26个共有峰,并指认了其中D‑无水葡萄糖成分，得到黔产金钗石斛花HPLC指纹图谱。所建立的黔产金钗石斛花HPLC指纹图谱特征性强、稳定性高、整体性好，能广泛应用于黔产金钗石斛花的质量控制和真伪鉴别。

技术领域

本发明涉及黔产金钗石斛花的质量分析领域，具体涉及黔产金钗石斛花的HPLC指纹图谱构建方法。

背景技术

金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl.)为兰科石斛属多年生附生草本植物，以新鲜或干燥茎入药，其主要有效成分多为多糖、生物碱等物质，有生津益胃，清热养阴的功效。贵州赤水是金钗石斛的道地产区，采用仿野生栽培技术的金钗石斛，获得了石斛类国家地理标志保护产品。金钗石斛花中含有多种生物活性成分，多糖、黄酮、挥发油等，有润肺、增强免疫力、抗衰老等作用，常用作茶饮和保健佳品。长期以来，金钗石斛的研究主要集中在茎上，目前对于金钗石斛花的HPLC指纹图谱研究未见文献报道。而市场上金钗石斛花存在真伪混杂、产品质量难以保证等问题。为进一步鉴别金钗石斛花的真伪及控制黔产金钗石斛花的质量，本发明以黔产金钗石斛花为研究对象，首次建立了黔产金钗石斛花的HPLC指纹图谱，建立的金钗石斛花HPLC指纹图谱特征性强、稳定性高，整体性好，能广泛应用于黔产金钗石斛花的质量控制和真伪鉴别。

发明内容

本发明的目的在于提供金钗石斛花的HPLC指纹图谱构建方法，以通过建立特征性强、稳定性高，整体性好的金钗石斛花HPLC指纹图谱，应用于黔产金钗石斛花的质量控制和真伪鉴别。

黔产金钗石斛花的HPLC指纹图谱构建方法包括如下步骤：

步骤(1)：供试品溶液的制备：取金钗石斛花粉末0.4g于锥形瓶中，加入甲醇溶液20mL，超声处理120min，冷却至室温，过滤并取滤液于蒸发皿中，在水浴锅上以50℃以下低温蒸干，残渣加甲醇溶液2mL溶解，移至2mL容量瓶中，加甲醇溶液定容，摇匀即得供试品溶液；

步骤(2)：确定色谱条件：色谱柱为Agilent SB-C₁₈(250×4.6mm，5μm)，流动相：乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)，检测波长：254nm；流速：0.8mL/min；柱温：30℃；进样量：10uL。

步骤(3)：进行方法学考察；

步骤(4)：指纹图谱建立及分析：按步骤(1)制备多个批次的金钗石斛花的供试品溶液，将各供试品溶液标定为S1、S2……Sn；将各供试品按步骤(2)的色谱条件进行检测，将得到的图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)进行分析，建立黔产金钗石斛花的HPLC指纹图谱。

优选方案一：作为对基础方案的进一步优化，还包括步骤(3)，流动相梯度洗脱程序具体比例如下设置：0.01～30min，5％-6％A；30～35min，6％-8％A；35～69min，8％-9％A；69～71min，9％-15％A；71～116min，15％-15.5％A；116～118min，15.5％-32％A；118～127min，32％-38％A；127～131min，38％-50％A；131～135min，50％-80％A；135～138min，80％-100％A。