[发明专利]一种雷帕霉素的纯化方法

说明书

本发明属于生物技术领域，尤其涉及雷帕霉素的纯化方法，该方法包括：在第一温度下，用第一有机溶剂对雷帕霉素发酵液进行抽提后，过滤得到滤液；将活性炭加入滤液中，得到第一中间产物；用第二有机溶剂水溶液洗脱所述第一中间产物的吸附杂质，得到第二中间产物；用第三有机溶剂循环洗脱所述第二中间产物，浓缩洗脱液，得到浓缩液；将所述浓缩液经高效逆流色谱分离后，得到纯化的雷帕霉素。此方法通过活性炭吸附/解吸附‑高效逆流色谱分离雷帕霉素，具有工艺操作性强，产品纯度高，收率高，适合在工业规模上生产等优点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种雷帕霉素的纯化方法。

背景技术

雷帕霉素(Rapamycin，RPM)又称西罗莫司(Sirolimus)，是一种新型大环内酯类强效免疫抑制剂，1999年美国FDA批准作为新型临床抗肾移植排斥反应药物，2001年获欧洲药物管理局(EMA)批准上市，2010年中国食品药品监督管理局(CFDA)批准上市。雷帕霉素相比目前临床使用的免疫抑制药物环孢素A和他克莫司(FK506)，具有口服剂量更小(每次仅需2～3mg)、抗排异作用更强，且副作用更少的优势，是目前市售最好的免疫抑制剂。另外，《Cell》、《Blood》、《Gut》等权威杂志研究表明雷帕霉素还具有治疗糖尿病、肥胖症、帕金森、胰腺癌等疑难杂症的新潜能，预示了雷帕霉素未来的应用前景十分广阔。

雷帕霉素主要通过吸水链霉菌或游动链霉菌微生物发酵法生产，目前发酵水平还比较低，大都小于1g/L。而且雷帕霉素亲脂性,易溶于甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷和氯仿等有机溶剂，极微溶于水，给雷帕霉素下游提取纯化带来极大困难。常规雷帕霉素提取大致流程：发酵结束后收集菌丝体，有机溶剂浸提，有机溶剂萃取、活性炭脱色、过滤除活性炭、滤液降压浓缩、硅胶柱层析、冷却析晶技术得到雷帕霉素。该方法不仅工艺较为繁琐，而且在工业操作上存在一定困难。如链霉菌经长时间工业补料发酵，下罐时菌丝体含量较高、较粘稠，不易过滤，需加水稀释；雷帕霉素主要位于菌丝体内，但生产发现发酵液也存在可观雷帕霉素，直接废弃较浪费；常规采用有机溶剂浸提、萃取等，不同类型有机溶剂用量大，对人体对环境均存在一定危害。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种雷帕霉素的纯化方法，采用活性炭吸附/解吸附-高效逆流色谱分离雷帕霉素的方式，不仅工艺操作性强，而且可以有效提高雷帕霉素的收率。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明提供了一种雷帕霉素的纯化方法，所述纯化方法包括：

在第一温度下，用第一有机溶剂对雷帕霉素发酵液进行抽提后，过滤得到滤液；

将活性炭加入滤液中，得到第一中间产物；

用第二有机溶剂水溶液洗脱所述第一中间产物的吸附杂质，得到第二中间产物；

用第三有机溶剂循环洗脱所述第二中间产物，浓缩洗脱液，得到浓缩液；将所述浓缩液经高效逆流色谱分离后，得到纯化的雷帕霉素。

在一个实施例中，所述第一温度为35-42℃。

在一个实施例中，所述第一溶剂为乙醇或丙酮；

和/或，所述第二溶剂包括乙酸乙酯、无水甲醇、乙腈和丙酮中的至少一种；

和/或，所述第三溶剂包括乙酸乙酯、无水甲醇、乙腈和丙酮中的至少一种。

在一个实施例中，所述在第一温度下，用第一有机溶剂对雷帕霉素发酵液进行抽提后，过滤得到滤液步骤中，抽提时间为2-4小时。

在一个实施例中，所述雷帕霉素发酵液体积与所述第一有机溶剂的体积比为1:1-1:2。

在一个实施例中，所述活性炭与所述第二有机溶剂的体积比为1:4.5-1:5.5；