[发明专利]一种木瓜样蛋白酶的抑制剂筛选试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种SARS-Cov-2木瓜样蛋白酶的抑制剂筛选试剂盒，其特征在于，包括以下组分：

SARS-Cov-2 木瓜样蛋白酶、底物肽Dabcyl-FTLKGGAPTKVT-E(Edans)、硼酸硼砂缓冲液。

2.根据权利要求书1所述的试剂盒，其特征在于，所述SARS-Cov-2 木瓜样蛋白酶浓度为0.01-1mg/mL;

所述底物肽Dabcyl-FTLKGGAPTKVT-E(Edans)的浓度为0.1mM-5mM；

所述硼酸硼砂缓冲液的浓度为10-100毫摩尔/升；所述硼酸硼砂缓冲液的PH为7-9。

3.一种权利要求书1或2所述的试剂盒的应用，其特征在于，所述试剂盒用于筛选SARS-Cov2 木瓜样蛋白酶的抑制剂。

4.根据权利要求书3所述的试剂盒的应用，其特征在于，其筛选SARS-Cov2 木瓜样蛋白酶的抑制剂的方法为：

（1）SARS-Cov2 木瓜样蛋白酶和底物肽储液均保存于-60到-100℃冰箱中；

（2）将SARS-Cov2 木瓜样蛋白酶在冻存板里或冰上室温下融化，取0.1-2uL稀释于97uL-98uL硼酸硼砂缓冲液中，加入检测板中；

（3）将0.1mM-10mM抑制剂储液0.1-2uL加入步骤（2）获得的溶液中，微震荡沉静10-30分钟；

（4）将底物肽0.1-2uL加入上述步骤（3）获得的溶液中，使用荧光酶标仪37摄氏度孵育，并监测342nm激发，采集496nm处的荧光发射值，每1-5分钟采一点；（5）重复步骤（1），（2）,（4）的过程，获得不加抑制剂组的荧光值，作为对照组；

（6）根据步骤（4）孵育时间15-30分钟处的荧光值，抑制剂组荧光值除以对照组荧光值可得到抑制蛋白活性的比例。

5.根据权利要求书4所述的试剂盒的应用，其特征在于，可以得到衡量抑制剂抑制能力的指标IC₅₀值；其方法在于，根据大于等于五个抑制剂不同浓度组别15-30分钟处的荧光值，对比不加抑制剂组的荧光值，前者除以后者可得到抑制蛋白活性的比例，从而拟合得出抑制蛋白活性一半所需的IC₅₀值。