[发明专利]一种检测EVs上携带的Der p 1的试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测EVs上携带的Der p 1相对表达水平的试剂盒，其特征在于，包括封闭液、Der p 1抗体、Der p 1抗体稀释液、洗涤液、生物素化CD63抗体、生物素化抗体稀释液、辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素及其稀释液、底物显色液和终止液。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述Der p 1抗体稀释液为NaHCO₃溶液，所述NaHCO₃溶液中NaHCO₃的体积摩尔浓度为0.1-1.0M。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素化CD63抗体为鼠抗人CD63抗体。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素化抗体稀释液为PBS溶液，所述PBS溶液中含有质量浓度为0.5-5％的BSA。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述底物显色液为TMB底物显色液。

6.利用权利要求1～5任一所述的试剂盒检测EVs上携带的Der p 1相对表达水平的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)包板：将Der p 1抗体包被于加样板孔内，孵育后洗涤加样板孔；

(2)封闭：加样板孔中加入封闭液封闭，孵育后洗涤加样板孔；

(3)上样：加样板孔中加入样品后，样品中的Der p 1与Der p 1抗体结合，洗涤加样板孔，将未结合的多余样品去除，空白孔加入等体积PBS溶液；

(4)二抗孵育：加样板孔中加入生物素化CD63抗体，孵育后洗涤加样板孔；

(5)链霉亲和素孵育：加样板孔中加入链霉亲和素，孵育后洗涤加样板孔；

(6)显色：加入底物显色液孵育，然后加入终止液后测量OD₄₅₀的数值。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述样品是采用以下步骤采集得到：采集患者外周静脉血，离心去除血细胞，取血浆离心去除细胞碎片得到。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述样品是采用以下步骤采集得到：采集患者鼻腔分泌物，离心去除炎症细胞后，再次离心去除细胞碎片得到。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述样品是采用以下步骤采集得到：采集患者外周静脉血，分离出外周血单个核细胞，给予Der p 1进行刺激后收取细胞培养上清得到。