[发明专利]一种检测EVs上携带的Der p 1的试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及生物检测领域，尤其涉及一种检测EVs上携带的Derp1的试剂盒及检测方法。本发明提供的检测细胞外囊泡(Extracellular vesicles，EVs)上携带的Derp1的相对表达水平的ELISA试剂盒，可用于检测血浆、鼻腔分泌物和细胞培养上清等中EVs上携带的Derp1的相对表达水平。该试剂盒适用于科研上检测过敏性/变态反应性病人不同的体液以及细胞上清中EVs上Derp1的相对表达水平，有助于科研人员研究EVs对变应性炎症疾病的抗原依赖的调控机制。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，尤其涉及一种检测EVs上携带的Der p 1的试剂盒及检测方法。

背景技术

呼吸道变应性炎症是最常见的过敏性炎症疾病之一，在全球范围内其患病率可高达10％，降低了患者的生活质量，给社会带来了严重的经济负担。环境中的过敏原，如：尘螨、花粉和豚草等，是引起呼吸道变应性炎症的关键因素。传统上认为，过敏原进入气道后，主要被树突状细胞等抗原递呈细胞摄取和处理，再递呈给CD4⁺T细胞，促进CD4⁺T细胞分化形成Th2细胞，进而释放IL-4、IL-5和IL-13等炎症因子，促进气道上皮细胞的杯状化生、气道高反应和气道炎症浸润等病理改变。

EVs是由人体多种细胞分泌的纳米级别的囊泡，其可携带丰富的生物活性分子，如：蛋白质分子和miRNA等，广泛地参与人体的生理和病理过程。近年来，相关的研究表明，抗原递呈细胞释放的EVs可携带过敏原活性成份、抗原递呈分子和共刺激分子等，从而参与抗原递呈细胞类似的抗原递呈过程。抗原递呈细胞所产生的EVs亦可通过体液进入气道分泌物和血液中参与对CD4⁺T细胞的免疫调控。因此，对细胞培养上清、气道分泌体和血浆等标本中携带Der p 1的EVs的表达水平的检测，在科研上有助于揭示EVs对呼吸道变应性炎症的调控机制。

在中国南方地区，屋尘螨是引起呼吸道变应性炎症最为常见的过敏原，而Der p 1是屋尘螨中引起过敏反应的关键成份。因此，寻找一种针对EVs上携带的Der p 1的检测方法显得十分重要。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种检测EVs上携带的Der p 1的试剂盒及检测方法，为特异性检测样品中EVs上携带的Der p 1的相对表达水平提供便利的手段。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种检测EVs上携带的Der p 1相对表达水平的试剂盒，包括封闭液、Der p 1抗体、Der p 1抗体稀释液、洗涤液、生物素化CD63抗体、生物素化抗体稀释液、辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素及其稀释液、底物显色液和终止液。

本发明的试剂盒，采用Der p 1包被加样板孔，使得样品中的被EVs携带的Der p 1和游离的Der p 1能够结合于板上；进一步利用EVs的特异性标记物CD63作为二抗，特异性检测EVs上的Der p 1；最后通过Streptavidin-HRP结合二抗上的生物素，利用显色液显色，放大信号。

作为本发明所述的试剂盒的优选实施方式，所述Der p 1抗体稀释液为NaHCO₃溶液，NaHCO₃溶液中NaHCO₃的体积摩尔浓度为0.1-1.0M。

作为本发明所述的试剂盒的优选实施方式，所述Der p 1抗体稀释液为NaHCO₃溶液，NaHCO₃溶液中NaHCO₃的体积摩尔浓度为0.2M。

作为本发明所述的试剂盒的优选实施方式，所述生物素化CD63抗体为鼠抗人CD63抗体。

作为本发明所述的试剂盒的优选实施方式，所述生物素化抗体稀释液为PBS溶液，所述PBS溶液中含有质量浓度为0.5-5％的BSA。