[发明专利]一种通过水稻微效基因克隆创建新等位变异的方法

权利要求书

1.一种通过微效基因克隆创建新等位变异的方法，其特征在于：(1)应用剩余杂合体策略构建近等基因系群体；(2)精细定位微效基因至仅包少数几个候选基因的区间内；(3)应用基因编辑技术定向突变候选基因，功能验证的同时获得新的等位变异；

该方法的详细步骤如下：

(1)筛选杂合区间覆盖目标基因所在区间的剩余杂合体单株，自交后发展F₂群体；

(2)从F₂群体中筛选杂合区间呈连续交叠排列的、新的剩余杂合体单株，分别自交发展F₂群体；

(3)从各F₂群体中筛选杂合区间内分别呈双亲纯合型单株，自交后获得分离区间呈连续交叠排列的近等基因系群体；

(4)首先分析各近等基因系群体的分离区间是否存在基因分离，然后比较各群体分离区间，缩小基因所在区间；

(5)重复步骤(1)至步骤(4)，直至将基因所在区间界定至仅包含少数几个候选基因的大小；

(6)应用基因编辑技术定向编辑候选基因获得突变体，通过分析突变体与野生型之间的表型差异，验证候选基因功能；

(7)在目标基因座位上发生突变、性状发生变异的突变体所携带的等位基因即为新的等位变异。

2.一个控制水稻粒长的微效基因qGL1-34.3，它的基因组序列如SEQ ID NO：1所示。

3.如权利要求2所述，qGL1-34.3的cDNA序列如SEQ ID NO：2所示。

4.如权利要求3所述，qGL1-34.3编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。

5.如权利要求2所述的qGL1-34.3的等位基因，它的基因组序列如SEQ ID NO：4所示。

6.如权利要求5所述的等位基因，它的cDNA序列如SEQ ID NO：5所示。

7.如权利要求6所述的等位基因，它编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。

8.扩增权利要求2或5所述基因的全长或部分片段的引物。

9.权利要求2或5所述基因在水稻遗传育种中的应用。